OTIMIZAÇÃO, VALIDAÇÃO E APLICAÇÃO DE UM TESTE QPCR PARA MEDIÇÃO DA CARGA VIRAL DE TORQUE TENO VIRUS COMO BIOMARCADOR DO STATUS IMUNE EM INDIVÍDUOS VIVENDO COM HIV/AIDS

Abstract

Introdução: O Torque teno virus (TTV) é um vírus de ssDNA não-envelopado, parece ser comensal em humanos e animais, com distribuição ubíqua na população e presente em diferentes tecidos e fluidos biológicos, especialmente na saliva. Devido a sua alta capacidade replicacional em imunocomprometidos, a avaliação de sua carga viral tem sido estudada como um potencial biomarcador para a competência imunológica. Neste estudo, avaliamos o título de TTV salivar em indivíduos vivendo com HIV/AIDS sob uso de TARV (terapia antirretroviral combinada) em relação com os principais parâmetros para o desenvolvimento do Sarcoma de Kaposi associado a AIDS (SK-AIDS): contagem de linfócitos T CD4+, carga viral do HIV e dados demográficos. Objetivo: Otimizar um teste qPCR in-house para medição de TTV salivar; verificar se há relação entre título de TTV salivar e outras características laboratoriais e demográficas destes indivíduos. Método: Trata-se de um estudo transversal com amostragem de conveniência de salivas coletadas de 276 indivíduos assintomáticos e também de 48 indivíduos com SK-AIDS, ambos sob uso de TARV. Os níveis circulantes de linfócitos T CD4+ e carga viral do HIV foram avaliados de modo pareado com a data da coleta da saliva, assim como os dados demográficos e laboratoriais. A otimização do teste foi baseada na construção de uma curva de referência quantitativa a partir de concentrações conhecidas de oligonucleotídeos sintéticos específicos desenhados para o atual estudo. Resultados: A eficiência do teste qPCR foi de 104% (slope: 3,22 e R2: 0,999). O TTV foi detectável na saliva de 80% dos indivíduos com HIV e 87% daqueles com SK-AIDS, com título de TTV salivar de 0,38 até 8,11 log10 cópias/mL. Entre os gêneros, a mediana do título de TTV foi de 3,3 (n = 200 homens) vs. 2,4 (n = 76 mulheres) (p < 0,0001). O título de TTV salivar foi inversamente correlacionado com o nível de células T CD4 + (p < 0,0001) e positivamente correlacionado com a concentração de HIV circulante (p < 0,0005), especialmente no grupo SK-AIDS (p < 0,0001). Conclusão: A medida dos títulos de TTV em amostras de DNA salivar por qPCR parece ser mais sensível do que outros parâmetros laboratoriais, sendo útil como um biomarcador complementar para avaliar o status imune de indivíduos que vivem com HIV, e potencialmente para outras doenças infecciosas e não-infecciosas. Ag. Financiadora: CNPQ e Laboratório de Virologia - HCFMUSP (LIM 52). Nr. Processo: 423401/2018-1.