Otimização de ELISA empregando a proteína Tc85-11 e planejamento fatorial

Abstract

A doença de Chagas é causada pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e a detecção de anti- corpos anti-T. cruzi no soro é um método para diagnosticar a doença. Neste trabalho, ELISA indi- reto foi otimizado para a detecção de anticorpos no soro de pacientes com doença de Chagas empregando a proteína Tc85-11 (Ag) da superfície do parasita tripomastigota. Na otimização das condições experimentais foi aplicado planejamento fatorial completo para os parâmetros tempo de incubação, diluições do Ag (0,08 mg mL -1 ), anticorpo primário (Ac) e anti-IgG conjugada com a peroxidase (Ac*). Os melhores resultados foram obtidos nas seguintes condições: 0,14 mg Ag/poço, 60 min para o tempo de incubação, diluições de 1:35 e 1:1000 para Ac e Ac*, respecti- vamente. O valor do limiar de reatividade (“cut off”) foi A 450nm = 0,371. O ELISA indireto foi aplicado em amostras de soros de pacientes infectados com doença de Chagas e pacientes com diferentes doenças sistêmicas. A proteína Tc85-11, a qual está envolvida com a adesão do para- sita na célula hospedeira, é também apropriada para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas.