MÉTODO SIMPLES PARA DESCONTAMINAÇÃO DE CONCENTRADOS DE PLAQUETAS COM HEMÁCIAS PARA POSTERIOR APLICAÇÃO EM ENSAIOS DE AGREGAÇÃO PLAQUETÁRIA E ATIVIDADES ENZIMÁTICAS

Abstract

Objetivos: Desenvolver um método simples, por centrifugação, para a remoção da contaminação de hemácias em concentrados de plaquetas (CPs) a serem empregados em ensaios de agregação e atividade enzimática. Material e métodos: O método apresentado neste resumo foi desenvolvido para a descontaminação de amostras e emprego destas em ensaios de uma tese de doutorado, projeto aprovado pelo Comitê de Ética da UFSM com parecer 5.959.387 (CAAE: 67871122.0000.5346). Foram empregadas uma Centrífuga Thermo Scientific Megafuge 16R e contador automático ABX Diagnostics Micros 60 para a contagem das plaquetas nas amostras antes e após as centrifugações. Inicialmente, selecionou-se 5 CPs com diferentes graus de contaminação por hemácias. Os CPs foram analisados em relação à contagem das plaquetas. Posteriormente, amostras de 3 mL dos CPs foram submetidos a diferentes programas de centrifugação: A (1000 rpm por 1 min); B (1000 rpm por 3 minutos); C (1000 rpm por 5 minutos); D (1000 rpm por 7 minutos); E (1000 rpm por 10 minutos); F (1500 rpm por 3 minutos) e G (1500 rpm por 5 minutos). Ao final das centrifugações as amostras foram analisadas visualmente e em relação a contagem das plaquetas. Em um segundo momento, 7 novos CPs contaminados com hemácias foram centrifugados nos 2 programas que apresentaram os melhores resultados na descontaminação do PRP, empregando o mesmo procedimento realizado previamente. Resultados: Os programas A, B e C não foram capazes de descontaminar os CPs, mantendo algum grau de contaminação por hemácias suspensas nos CPs. Os programas E e G foram capazes de remover as hemácias em suspensão, mas observou-se a formação de pellet de plaquetas no fundo dos tubos e redução da contagem, com perda de plaquetas nesses programas. Os CPs centrifugados nos programas D e F apresentaram descontaminação dos CPs pela sedimentação das hemácias sem a formação de pellets de plaquetas, com redução mínima das contagens das plaquetas na avaliação inicial. Na segunda avaliação, os programas D e F mantiveram avaliação visual e contagens semelhantes, mantendo 89,5% e 90,7% das plaquetas em suspensão, respectivamente. Discussão: A contaminação de CPs com hemácias é indesejada e diminui a qualidade do hemocomponente, no entanto, em razão da demanda por este hemocomponente ser alta, por vezes faz-se necessária a liberação de CPs nesta condição. A presença das hemácias em CPs pode alterar parâmetros de atividade plaquetária e enzimáticos, o que torna pertinente a avaliação da qualidade destes CPs. No entanto, para submeter os CPs a ensaios de agregação plaquetária e atividades enzimáticas a amostra deve estar livre de contaminação por hemácias. Há métodos de descontaminação envolvendo uso de soluções hemolíticas, no entanto, os constituintes das soluções podem provocar algum estresse à amostra ou ainda inviabilizar o emprego nos ensaios, como no caso da agregação. Em razão disso procuramos desenvolver um método de descontaminação por centrifugação com baixa velocidade de rotação com a finalidade de separar a amostra das hemácias sem grandes perdas das plaquetas. Conclusão: Os métodos D e F se mostraram eficientes na descontaminação dos CPS, contudo, como a perda das plaquetas foi de aproximadamente 10% em ambos, o melhor método escolhido para tal fim foi o método F em razão do menor tempo de centrifugação.