红景天苷调控<italic>miRNA-1343-3p/MAP3K6/MMP24</italic>信号分子抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

Abstract

目的本研究旨在探讨红景天苷调控miR-1343-3p/MAP3K6（丝裂原激活激酶激酶激酶6）/MMP24（膜型基质金属蛋白酶24）信号分子，在抑制胃癌细胞增殖和迁移中的作用。方法将人胃癌细胞（MGC-803）按照红景天苷药物浓度不同分为对照组（0 μmol/mL）和低（6 μmol/mL）中（12 μmol/mL）高（24 μmol/mL）红景天苷剂量组；CCK-8实验检测红景天苷药物对人胃癌细胞抗增殖作用；克隆形成实验检测红景天苷药物对人胃癌细胞克隆形成能力的影响；Transwell实验检测红景天苷对人胃癌细胞侵袭能力的影响；细胞划痕实验检测红景天苷对人胃癌细胞迁移能力的影响；高通量测序（RNA-seq）检测了胃癌细胞在红景天苷作用后24 h时对照组和药物组miRNA和mRNA的表达量，将具有明显差异表达的miRNA聚类并预测其靶基因。通过Gene Ontology（GO）和KEGG富集分析，预测差异表达miRNA靶基因的相关功能及相关代谢通路，并建立miRNA与靶基因mRNA间的互作网络。免疫细胞荧光检测相关靶蛋白的表达；q-PCR检测相关候选基因的转录。结果CCK-8细胞毒性实验表明，红景天苷抑制了MGC-803细胞的增殖（P < 0.01）。细胞克隆形成实验表明，红景天苷降低了MGC-803细胞克隆形成能力（P < 0.000 1）。细胞侵袭实验表明，红景天苷降低了MGC-803细胞侵袭能力（P < 0.000 1）。划痕实验表明红景天苷降低了细胞迁移能力（P < 0.000 1）。高通量测序发现红景天苷作用人胃癌细胞后，有44个miRNA的表达量发生了显著差异性变化（P < 0.05），生物信息学分析结果显示差异表达miRNA所对应的靶mRNA有1 384个，红景天苷作用后引起抑癌因子miR-1343-3p表达明显上调（P < 0.01），而受其调控与增殖和迁移相关的MAP3K6和MMP24基因转录及表达明显下调（P < 0.05）。免疫荧光实验证明红景天苷降低了MAP3K6和MMP24基因的蛋白表达水平（P < 0.000 1）。q-PCR实验证明红景天苷降低了MAP3K6和MMP24基因的mRNA表达水平（P < 0.000 1），而miR-1343-3p基因的miRNA表达上调（P < 0.000 1）。结论红景天苷调控miRNA-1343-3p/MAP3K6/MMP24信号分子抑制胃癌细胞增殖和侵袭。

Keywords

• 微小RNA;红景天苷;胃癌细胞;差异表达;调控机制