Evaluación de métodos de marcación-radioactivos y no radioactivos empleados en la elaboración de sondas diagnósticas de malaria

Abstract

Se probaron métodos de marcación radioactivos dentro de los cuales el sistema Random Primers resultó mejor que el de Nick Translation. Se obtuvieron sondas con mayor actividad especifica (1-2X1O9dpmIug) y una sensibilidad 10 veces mayor en la detección de ADN de Plasmodium falciparum. La sensibilidad alcanzada (12pg) obtenida con la sonda PFCOL692 desarrollada y caracterizada en nuestro laboratorio, fue igual a la obtenida con la sonda pRepHind, una de las más utilizadas en los laboratorios de otros países. El método de marcación no radioactivoconfotobiotina mostró ventajas sobre la marcación por Nick Translation con nucleótidos biotinilados y se alcanzó una sensibilidad de 135 pg de ADN de P. falciparum. También se probó un sistema degeneración de señales fluorescentes mediante el empleo de proteasas, y los resultados preliminares muestran sus posibilidades como método de detección.