Acta Scientiarum: Biological Sciences (Apr 2010)
Polissacarídeos sulfatados isolados das clorofíceas Caulerpa racemosa e Caulerpa cupressoides – extração, fracionamento e atividade anticoagulante =Sulfated polysaccharides isolated from Caulerpa racemosa and Caulerpa cupressoides (Chlorophyceaes) – extraction, fractionation and anticoagulant activity
Abstract
A incidência de doenças cardiovasculares e os efeitos adversos da heparinoterapia têm motivado a busca por novos agentes terapêuticos e os polissacarídeos sulfatados (PS) de algas marinhas têm sido reportados como fontes alternativas para tal. Objetivou-se avaliar o potencial anticoagulante dos PS totais (PST) isolados e fracionados das clorofíceas Caulerpa racemosa e Caulerpa cupressoides. Inicialmente, os PST foram extraídos com papaína em tampão acetato desódio 0,1 M (pH 5,0) contendo cisteína 5 mM e EDTA 5 mM, seguidos de fracionamento em coluna de troca iônica de DEAE-celulose com gradiente de NaCl. As frações obtidas foram analisadas por eletroforese em gel de agarose a 0,5% e a atividade anticoagulante, mensurada pelo tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), usando-se plasma humano normal e comparada a uma curva-padrão de heparina (193 UI mg-1). Verificaram-se semelhantes perfiscromatográficos entre os PS de ambas as espécies, porém com padrões de mobilidades distintas quando as frações foram comparadas por eletroforese. Os PS modificaram o TTPA, cujas atividades anticoagulantes foram de apenas 21,23 e 24,36 UI mg-1, quando eluídos com 0,75 M de sal para C. racemosa e C. cupressoides, respectivamente. Portanto, PS anticoagulantes isolados dasclorofíceas C. racemosa e C. cupressoides resultaram em efeitos anticoagulantes inferiores aos da heparina. Estudos comparativos dessas moléculas também são sugeridos como ferramentas auxiliares na identificação de algas do mesmo gênero.The incidence of cardiovascular diseases and adverse effects from heparintherapy have led to a search for new therapeutic agents, and the sulfated polysaccharides (SP) of seaweeds have been reported as alternative sources. The aim of this work was to evaluate the anticoagulant potential of total SP (TSP) isolated and fractionated from Caulerpa racemosa and Caulerpa cupressoides (Chlorophyceaes). Initially, the TSP were extracted with papain in 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0) containing 5 mM cysteine and 5 mM EDTA, followed by fractionation on ion exchange DEAE-cellulose column with NaCl gradient. The obtained fractions were analyzed by 0.5% agarose gel electrophoresis and the anticoagulant activity measured by the activated partial thromboplastin time (APTT) using normal human plasma, and compared to a standard heparin curve (193 IU mg-1). Similar chromatographic profiles of SP were shown on both species, butwith distinct mobility patterns, when the SP fractions were compared by electrophoresis. SP eluted with 0.75 M of NaCl modified the APTT, whose anticoagulant activities were only 21.23 and 24.36 IU mg-1 for C. racemosa and C. cupressoides, respectively. Therefore, anticoagulant SP isolated from chlorophyceaes showed effects inferior to heparin, and comparative studies of these molecules are also suggested as auxiliary tools in the identification of algae of the same genus.
