无动物源性成分人胚胎干细胞培养体系与其它人胚胎干细胞培养体系的比较

Abstract

【目的】 通过比较ｈＥＳＣ在各培养体系中未分化表面标记物及以多能性因子的表达，进一步筛选出更优化、安全有效的ｈＥＳＣ培养体系。【方法】 四种培养体系分别为：新建立的无动物源性的人包皮饲养层（ＸＦ－ＨＦＦ）联合成分确定培养基（ＣＤＭ）的无动物源性培养体系（ＸＦ－ＨＦＦ／ＣＤＭ），对照组为ＸＦ－ＨＦＦ联合添加了２００ ｍＬ／Ｌ人血清（ＨＳ）的培养基的培养体系（ＸＦ－ＨＦＦ／ＨＳ），ＨＳ包被的培养皿联合ＣＤＭ的无饲养层培养体系（ＨＳ－Ｍａｔｒｉｘ／ＣＤＭ），以及传统的人包皮饲养层（ＸＣ－ＨＦＦ）联合添加了２００ ｍＬ／Ｌ血清替代物（ＫＳＲ）的培养基的培养体系。通过观察克隆形态、细胞计数、免疫荧光、流式细胞术、荧光定量ＰＣＲ，来比较４种ｈＥＳＣ培养体系中的细胞增殖率、未分化表面标记物和多能性因子的表达情况，以及ｈＥＳＣ在ＸＦ－ＨＦＦ／ＣＤＭ培养体系中长期培养后，对其未分化状态、多能性和染色体完整性的检测。【结果】 在几种培养体系中，同一代次的ｈＥＳＣ表达ＳＳＥＡ－４、ＴＲＡ－１－６０、Ｏｃｔ３／４和ｈＴＥＲＴ的情况在ＸＦ－ＨＦＦ／ＣＤＭ组和ＸＣ－ＨＦＦ／ＫＳＲ组中相似（Ｐ ＞ ０．０１），且均高于其它两组培养体系（Ｐ ＜ ０．０１）。ｈＥＳＣ在ＸＦ－ＨＦＦ／ＣＤＭ培养体系中长期培养超过４０代次，仍能表达ｈＥＳＣ未分化表面标记物ＳＳＥＡ－３，ＳＳＥＡ－４，ＴＲＡ－１－６０，ＴＲＡ－１－８１及多能性因子ｈＴＥＲＴ、Ｏｃｔ３／４，在ＳＣＩＤ小鼠体内能分化成含３个胚层的畸胎瘤，以及保持完整的二倍体核型。【结论】新构建的完全无动物源性的ｈＥＳＣ培养体系的培养效率与传统添加ＫＳＲ的培养体系相似，且优于相同ＣＤＭ下的无饲养层培养体系以及相同饲养层下的含人血清的干细胞培养条件。

Keywords

• 人胚胎干细胞;无外源性成分;成分确定;比较;培养