Producción de la proteína de choque térmico HSC70 Recombinante en Escherichia Coli BL21 (DE3) para generar anticuerpos policlonales

Abstract

Antecedentes. Los organismos vivos responden al estrés aumentando la síntesis de proteínas. El estrés por choque térmico ha sido el más estudiado y las proteínas que se inducen, se han denominado genéricamente como proteínas de choque térmico. Objetivo.En este trabajo se establecieron las condiciones óptimas de producción de la proteína HSC70, expresada en E.coli BL21 (DE3) y de los anticuerpos policlonales que permitan identificarla. Material y métodos. Mediante varios ensayos se establecieron las concentraciones óptimas del agente inductor isopropil- -D-thiogalacto­piranosido (PTG), del inóculo bacteriano, de empleo de los plásmidos de expresión pET-3a y pET-28a (+); y el método más eficiente para la recuperación de las formas soluble o insoluble de la proteína y de anticuerpos policlonales que la identifiquen. Resultados. Encontramos que el inóculo de cinco colonias con IPTG (2mM) en tubos con cinco mililitros de medio modificado e incubadas por 24 horas a 37°C con agitación constante (200 r.p.m) y tratamiento de sonicación, produce el mejor rendimiento de HSC70. La calidad de la proteína inducida se estableció mediante "Western blotting". Conclusión. La proteína recombinante así obtenida permitió, generar anticuerpos policlonales que a su vez permiten detectar la proteína HSC70 natural en la membrana citoplasmática de diferentes células por inmunofluorescencia, en ELISA, en Western Blot y en pruebas de bloqueo de infección de rotavirus.

Keywords

• formación de anticuerpos
• proteínas de choque térmico HSC70
• Escherichia coli.