بیان نوترکیب پروتئین هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا A (H1N1) خوکی سویه‌ی ایرانی در رده‌ی سلولی حشره با استفاده از سیستم باکولوویروس

Abstract

مقدمه: ویروس آنفلوانزا، عامل بیماری آنفلوانزا است که به علت ایجاد اپیدمی‌های سالانه در بین طیف وسیعی از میزبان‌ حیوانی و انسانی مورد توجه بوده است. هدف از انجام این مطالعه، بیان مؤثر و قوی پروتئین نوترکیب هماگلوتینین سویه‌ی ایرانی ویروس آنفلوانزا (H1N1)A خوکی در رده‌ی سلولی حشره‌ی Sf9 به کمک سیستم بیانی باکولوویروس بود. روش‌ها: ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H1N1 خوکی با پرایمر اختصاصی حاوی توالی آنزیم‌های برشی تکثیر و کلون گردید و سپس به منظور تولید یک بکمید نوترکیب با استفاده از سیستم Bac-to-Bac به سلول DH10Bac‌ انتقال داده شد. بیان و فعالیت پروتئین نوترکیب در سلول با استفاده از تکنیک‌های مولکولی مورد سنجش قرار گرفت. یافته‌ها: تولید ژن هماگلوتینین به طول 1701 جفت‌باز تأیید و سلول حشره بعد از دریافت بکمید نوترکیب، پروتئینی به وزن تقریبی 66 کیلودالتون را بیان نمود. اندازه‌ی سلول‌های آلوده شده و هسته‌ آن‌ها افزایش یافت و با ایجاد ظاهر گرانولار، از سطح فلاسک کشت سلول جدا شدند. پس از گذشت 48 ساعت از عفونت، سلول‌های آلوده، با جذب گلبول‌های قرمز جوجه، به شکل تجمعات سلولی ظاهر شدند. عدم تشکیل کلامپ سلولی، نشان از صحت آزمون و مهار فعالیت همادسورپشن بود. مقدار پروتئین حاصل معادل 76/10 میکروگرم بر 100 میکرولیتر معادل 1/0 میلی‌گرم/میلی‌لیتر گزارش شد. نتیجه‌گیری: طبق نتایج سیستم بیانی باکولوویروس، قادر به بیان پروتئین نوترکیب در سلول حشره بود و بنابراین، راه حل مناسبی برای جایگزین کردن آن به عنوان نسل جدید واکسن به جای واکسن‌های مبتنی بر تخم مرغ و یا کشت سلول می‌باشد.

Keywords

• ویروس آنفلوانزا h1n1
• هماگلوتینین
• حشره
• باکولوویروس
• واکسن