DESENVOLVIMENTO E CARACTERIZAÇÃO DA RESISTÊNCIA AO VENETOCLAX EM MODELOS DE LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA COM ANÁLISE CELULAR E MOLECULAR

Abstract

Introdução: A leucemia mieloide aguda (LMA) é uma neoplasia hematológica maligna heterogênea causada pelo acúmulo de mutações e alterações moleculares nas células-tronco hematopoiéticas e é responsável pelo maior número de mortes anuais por leucemias. O tratamento de pacientes com LMA permanece substancialmente inalterado há mais de 30 anos. Recentemente, o paradigma do tratamento da LMA vem sendo superado com o aparecimento de terapias alvo seletivas. Neste contexto, o venetoclax tem ganhado destaque e é um forte candidato a se tornar terapia de primeira linha a médio prazo. O venetoclax (inicialmente denominado ABT-199) é um inibidor seletivo de BCL2 e tem apresentado resultados promissores em grupos de pacientes com LMA desfavoráveis ou idosos. As proteínas da família BCL2 são fundamentais para a apoptose e desempenham um papel importante na patogênese da LMA. Os mecanismos envolvidos na resistência intrínseca ao venetoclax são conhecidos na LMA, mas a aquisição de resistência ainda é um ponto a ser explorado e de interesse clínico. Objetivos: Induzir resistência nas células leucêmicas mais sensíveis ao venetoclax, assim como caracterizar os efeitos moleculares e biomoleculares da resistência farmacológica, com venetoclax. Material e métodos: As linhagens celulares leucêmicas de U-937, NB4, Kasumi-1, MOLM-13, MV4-11 e THP-1, foram utilizadas. A viabilidade e resistência celular foi avaliada por ensaio de MTT, a clonogenicidade pelo ensaio de formação de colônias, a apoptose, dano mitocondrial e ciclo celular por citometria de fluxo, o perfil metabólico foi analisado por Seahorse XF96 e as vias de sinalização por Western blotting. Os testes de Spearman, Mann-Whitney ou ANOVA foram utilizados conforme apropriado. Valores de p < 0.05 foram considerados significativos. Resultados: O tratamento com venetoclax reduziu de forma dependente de tempo e de concentração a viabilidade celular de todos os modelos avaliados. As células MOLM-13-VR e MV4-11-VR expostas a concentrações crescentes de venetoclax apresentaram resistência 200 vezes em comparação com as células parentais (p < 0.05). Foi observado menores taxas de dano mitocondrial e apoptose nas células resistentes após exposição ao fármaco (p < 0.05), como também a formação de colônias e ciclo celular se manteve estável, quando comparadas as células parentais (p < 0.05). No cenário molecular, a expressão de proteínas relacionadas a marcadores de apoptose (clivagem de PARP1), dano em DNA (γH2AX) é menor nas células de LMA resistentes, após exposição ao venetoclax. Discussão e conclusão: O desenvolvimento das células resistentes ao venetoclax, MV4-11-VR e MOLM-13-VR, foi efetivo através da exposição intermitente e escalonada ao fármaco. A resistência farmacológica ao venetoclax apresentou que a expressão de proteínas relacionados ao dano de DNA e apoptose está reduzido nas células resistentes . Apoio: FAPESP, CNPq e CAPES.