مجله دانشگاه علوم پزشکی سبزوار (Jan 1970)
شناسایی سالمونلا تیفی بر اساس توالی ViaB با استفاده از PCR
Abstract
زمینه و هدف: تب تیفوئید توسط سالمونلا تیفی ایجاد می شود و هنوز یکی از مهم ترین بیماری های عفونی در سر تا سر دنیا می باشد. روش های متعددی از جمله روش های بیوشیمیایی و الایزا برای شناسایی این باکتری استفاده شده است که علاوه بر زمان بر بودن و هزینه فراوان، بعضا با پاسخ کاذب همراه می باشد. لذا هدف از این تحقیق شناسایی باکتری سالمونلا تیفی از طریق روش PCR می باشد که روشی سریع، ارزان و اختصاصی است. مواد و روش ها: در این مطالعه توصیفی که به روش تشخیص انجام شد از polymerase chain reaction (PCR) جهت شناسایی سالمونلا تیفی استفاده شد. این سویه قبلا توسط روش های بیوشیمیایی مورد تایید قرار گرفت. جهت شناسایی به وسیله PCR، نسبت به طراحی یک جفت پرایمر اختصاصی ژن ViaB اقدام گردید. سپس نسبت به انجام واکنش PCR اقدام و محصول آن در معرض هضم با آنزیم محدودکننده Taq1 قرار گرفت. برای ارزیابی اختصاصیت این روش از 6 سویه مختلف باکتری به عنوان کنترل منفی استفاده شد. جهت بررسی حساسیت واکنش PCR از سریال رقت استفاده شد. یافته ها: محصول PCR سالمونلا تیفی 530 جفت باز بود که با هضم آنزیمی صحت محصول PCR تایید شد. برای ارزیابی اختصاصیت این روش از باکتری سالمونلا تیفی موریوم، شیگلا فلکسنری، اشریشیا کلای، کلستریدیوم بوتولینیوم، استافیلوکوکوس اورئوس و باسیلوس سابتیلیس به عنوان کنترل منفی مورد استفاده قرار گرفت و نتایج PCR آن با پرایمر طراحی شده منفی بود. حساسیت این روش در حدود CFU/ml 50 ارزیابی شد. نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان می دهد که شناسایی ژن viaB با روش PCR برای تشخیص سالمونلا تیفی در نمونه های کلینیکی می تواند به عنوان روشی سریع، ارزان، اختصاصی و با حساسیت بالا مورد استفاده قرار گیرد.
