野生动物学报 (Nov 2023)
基于ERA-CRISPR/Cas12a-LFD的犀牛特异性检测技术
Abstract
野生犀牛（Rhinocerotidae）种群的生存正面临极大威胁，包括栖息地减少、碎片化及偷猎等，在对打击犀牛角等非法贸易的努力中，物种的特异性检测至关重要，为了在现场就可以迅速完成犀牛源性成分鉴定，将酶促重组等温扩增（enzymatic recombinase amplification，ERA）、CRISPR/Cas12a和侧向流试纸条（lateral flow dipstick，LFD）技术相结合，研发了一种适于现场使用的犀牛特异性核酸检测方法。结果表明：该方法只能检测出5种现生犀牛特异性核酸，与其他哺乳动物核酸测试样本没有交叉反应，最低检测下限可达100 拷贝/孔，具有较好的特异性和灵敏度。该方法可以在36.5~40.0 ℃条件下，27~30 min完成特异性识别，无需高规格的实验室环境和精密仪器，从而提供更快、更准确和更灵敏的检测方案。
