Seleção em gradiente de Percoll® sobre os parâmetros espermáticos do sêmen bovino congelado Selection bovine frozen semen in Percoll® gradient on spermatic parameters

Abstract

Na produção in vitro de embriões, técnicas de seleção espermática são usadas, dentre elas, o gradiente descontínuo de Percoll®. O objetivo foi avaliar a integridade da membrana plasmática (eosina-nigrosina), do acrossomo (trypan blue- Giemsa – TBG, lecitina do amendoim conjugada ao isotiocianato de fluoresceína associado ao iodeto de propídeo - Fitc-PNA/PI) e da cromatina (azul de toluidina), em espermatozóide bovino congelado. Vinte e nove amostras foram analisadas nos momentos pós-descongelação (PD) e pós-Percoll® (PP). As variáveis expressas em porcentagem foram submetidas à análise de variância e foi empregado o teste de Tuckey para a comparação entre médias. O estudo da associação entre variáveis foi feito pelo teste de correlação de Pearson. Constataram-se, entre os momentos PD e PP, diferenças significativas (p<0,05) para a motilidade, integridade de membrana plasmática e número de espermatozóides vivos com acrossomo íntegro (TBG e Fitc-PNA/PI), com maiores valores obtidos PP. O percentual de células com alteração na condensação da cromatina não diferiu entre os momentos estudados. Conclui-se que o gradiente descontínuo de Percoll® foi eficaz na seleção de uma maior população de células móveis, com membranas plasmática e acrossomal íntegras, sem haver alteração na condensação da cromatina nuclear.At in vitro embryo production sperm selection techniques are used, one of them is Percoll® density-gradient. The aim with this study was to evaluate the plasmatic membrane (eosin-nigrosin), acrosomal (trypan blue-Giemsa; fluorescein isothiocyanate conjugated peanut agglutinin lecitin/propidium iodide (FITC-PNA/PI) and chromatin (toluidine blue) integrity, in frozen bovine spermatozoa. Twenty nine samples were analysed at post-thaw (PD) and post-Percoll® moments. Variable expressed in percentage were submitted to ANOVA and used Tuckey’s test for mean comparison. The association between variables was made by Pearson’s correlation. There were significant differences (p<0.05) between moments for motility, plasmatic membrane integrity and number of live spermatozoa with intact acrosome (FICT -PNA/PI), with higher values for PP. The percentage of cells with chromatin alteration did not differed between moments. In conclusion, Percoll® density-gradient was efficient to select a higher population of motile cells with integral plasmatic and acrosomal membranes, without alterations in nuclear chromatin condensation.