人类端粒酶活性重组及其重组特异性

Abstract

【目的】对Hela 细胞端粒酶进行活性重组并探讨其重组特异性。【方法】以RT-PCR 法从纯化的人端粒酶复合 体中扩增人类端粒酶RNA(hTR)基因片段, 将其克隆至含有SP6 启动子的pGEM3f +质粒中, 构建hTR 的体外转录体系以获 得体外合成的hTR。与端粒酶蛋白组分进行活性重组。四膜虫端粒酶RNA 及16S rRNA 作为重组反应对照组, 以探测其重 组特异性。【结果】经RT-PCR 扩增出450 bp 片段;体外转录重组载体经酶切图谱和PCR 扩增鉴定构建成功;体外转录的 RNAs 经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了鉴定;活性重组实验中, 对照组的MNase 处理但未作重组管为阴性;3 组重组管中, 经 M Nase 处理后的端粒酶蛋白特异性地与经体外转录所得的人端粒酶RNA 组分重组而重获端粒酶活性, 与四膜虫端粒酶RNA 及16S RNA 重组均不能获得酶活性, 说明端粒酶复合体有自身不可替代的组成成分, 而且不同生物体的端粒酶有各自特异的 酶蛋白组分和RNA 组分。【结论】Hela 细胞端粒酶蛋白组分能特异地与体外合成的hTR 重组端粒酶活性。