Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública (Oct 2003)
Evaluación serológica de una proteína recombinante a partir de una cepa aislada del virus de la fiebre amarilla en el Perú: un estudio piloto
Abstract
Objetivo: Evaluar serológicamente una proteína recombinante de 66 kDa (Er66) de una cepa del virus de la fiebre amarilla aislada en el Perú usando anticuerpos inmunoreactivos. Material y métodos: La proteína Er66 fue expresada in vitro en la bacteria Escherichia coli y enfrentada a títulos de 1/100, 1/50 y 1/25 de anticuerpos monoclonales, y a sueros con anticuerpos IgM e IgG inmunoreactivos contra el virus de la fiebre amarilla mediante ensayos de Western blot (WB). Asimismo, se evaluaron proteínas totales de las cepas de referencia del virus dengue (DEN) y fiebre amarilla como controles de antigenicidad. Resultados: La proteína recombinante Er66 presentó antigenicidad contra títulos de 1/50 y 1/25 de anticuerpo monoclonal (MAB8701); sin embargo, no se observó inmunoreactividad en sueros positivos para fiebre amarilla y dengue. Los ensayos con extractos crudos de la cepa de fiebre amarilla Asibi 17D (PTFA) revelaron que la antigenicidad de las proteínas virales comprendidas entre 60 y 80 kDa fue afectada negativamente a temperaturas desnaturalizantes de 100°C. En cambio, tratamientos con ß-mercaptoetanol sin calor generó un aumento de la antigenicidad de dichas proteínas. Siguiendo este mismo principio, la proteína Er66 fue sometida a tratamientos desnaturalizantes con ß-mercaptoetanol sin incluir calor y fue enfrentada nuevamente a los sueros reactivos. El resultado final reveló que la proteína Er66 generó inmunoreactividad frente a sueros con altos títulos de anticuerpos IgM e IgG para fiebre amarilla mientras que en otras muestras se observó una débil señal. Conclusiones: Los datos obtenidos en este trabajo demuestran que la Er66 pudo ser reconocida por anticuerpos IgM e IgG específicos para fiebre amarilla presentes en sueros de pacientes infectados. Los datos presentados en este artículo sugieren el uso de proteínas recombinantes como posibles candidatas de valor diagnóstico para la FA.
