Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Jan 2016)
慢病毒介导shRNA抑制垂体腺瘤PTTG基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响
Abstract
摘 要: 【目的】 观察慢病毒介导的shRNA对GH3和AtT20型垂体腺瘤中垂体肿瘤转化基因(PTTG)表达的抑制作用,以及对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制探讨?【方法】 筛选最佳抑制效果的干扰序列构建PTTG基因shRNA的慢病毒表达载体,转染GH3和AtT20型垂体腺瘤细胞?流式细胞仪分析细胞转染效率,RT-PCR和Western blot检测细胞PTTG基因mRNA和蛋白的表达水平,MTT和EdU法分别检测靶向PTTG的shRNA对肿瘤细胞增殖生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期变化?Transwell小室检测细胞侵袭能力的变化,基因芯片筛查干扰后的基因表达谱差异并进行生物信息学分析?【结果】 细胞转染表达PTTG基因shRNA的慢病毒载体后,能显著抑制肿瘤细胞PTTGmRNA和蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P < 0.05),细胞的增殖能力受到明显抑制,且增殖抑制效应具有时间依赖性;细胞生长显著变慢,G0/G1期细胞比例显著增高,克隆形成能力下降,细胞侵袭能力也显著减弱,均与对照组相比有统计学差异(P < 0.05)?PI3K等信号通路的基因表达也发生显著变化?【结论】 慢病毒介导shRNA沉默PTTG基因表达可能是通过对PI3K信号通路的调控,抑制了GH3和AtT20垂体腺瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的体外增殖和侵袭能力?
