Medicina (Dec 2012)
Exequibilidade do DDRT-PCR para análise da expressão gênica diferencial em células de medula óssea murina
Abstract
Modelo do estudo: Estudo Experimental. Introdução: Atualmente a pesquisa com células-tronco tem gerado grande interesse devido a sua aplicabilidade no campo na medicina regenerativa. A medula óssea é considerada a maior fonte de células-tronco adultas e o estabelecimento de novos métodos para a análise da expressão gênica torna-se estritamente necessário. Desse modo, o "Differential Display Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (DDRT-PCR)", pode ser uma ferramenta acessível para a investigação de pequenas diferenças no nível de expressão gênica em diferentes tipos celulares, sob distintas condições. Objetivo: Neste presente trabalho nós investigamos a exequibilidade do DDRT-PCR na identificação de diferenças no nível de expressão gênica global em células da medula óssea de camundongos sob duas condições. Métodos: Primeiramente, a medula óssea foi isolada frescamente e uma secunda parte foi cultivada por uma semana sem troca de meio. Posteriormente, as células da medula (fresca e cultivada) foram submetidas a análise da expressão gênica, seguindo a metodologia de DDRT-PCR. Resultados: Inicialmente, foi possível identificar em células da medula óssea com uma semana de cultivo, pequenas alterações morfológicas (células ovais para fibroblastóides) e no perfil de proteínas, por meio da visualização de bandas em SDS-Page gel. Finalmente, a análise da expressão gênica por DDRT-PCR, mostrou uma expressão diferencial com a presença de três bandas (1300, 1000 and 225 pb) exclusivamente expressas na medula óssea fresca e mais duas bandas (400 and 300 pb) presentes somente nas células de medula cultivadas. Conclusões: Em suma, a metodologia de DDRT-PCR mostrou-se eficiente para a identificação de pequenas diferenças no nível de expressão gênica em células da medula óssea sob duas definidas condições. Portanto, nós acreditamos que o DDRT-PCR possa ser designado de forma rápida e eficiente para a análise diferencial de expressão gênica em diferentes tipos de células-tronco, sob diferentes condições.
Keywords
