Ciência e Agrotecnologia (Oct 2006)
Obtenção de anticorpos policlonais contra proteínas presentes em plantas afetadas pela anomalia declínio dos citros Production of antibodies against proteins expressed in plants affected by citrus blight
Abstract
O declínio dos citros, uma anomalia de etiologia desconhecida, continua sendo um dos entraves para o setor citrícola, uma vez que não existem medidas de prevenção e controle para as plantas acometidas pela anomalia. Para a caracterização e estudo da anomalia, muita ênfase tem sido dada à mudança na expressão gênica de plantas afetadas, que culmina no acúmulo de proteínas. Proteínas totais extraídas dos vasos do xilema de raízes de plantas afetadas pela anomalia, quando separadas por eletroforese no sistema SDS-PAGE 12,5%, apresentam um perfil eletroforético contendo proteínas com massas moleculares de cerca de 21, 23, 31 e 42 kDa, sendo que plantas consideradas sadias apresentam proteínas de 21, 31 e 42 kDa. Com este trabalho objetivou-se obter anticorpos contra essas proteínas, bem como a titulação adequada para os mesmos. Duas inoculações subcutâneas foram realizadas em coelhos, espaçadas de 15 dias, ambas usando cerca de 120 µg de proteína isolada, sendo que cada coelho recebeu uma proteína específica, visando à produção de anticorpos. A primeira sangria foi realizada aos 21 dias após a primeira inoculação e as demais semanalmente. A técnica Western Blotting foi realizada para a confirmação da especificidade dos anticorpos, bem como para determinação das respectivas titulações. O título 1:1500 foi aquele que proporcionou maior especificidade para as proteínas de 21, 23 e 31 kDa. Para a proteína de 42 kDa a melhor titulação foi de 1:3000. Estes anticorpos poderão ser utilizados em estudos para caracterização dessas proteínas.Citrus blight, an abnormality of unknown etiology, is a major problem in citrus production, since there are no prevention and control measures to be taken. In order to characterize this abnormality, changes in genetic expression of the affected plants have exhaustedly been studied. Crude proteec extract obtained from the root xylem of the abnormal plants, when separated by SDS-PAGE 12,5%, display a profile with 21, 23, 31 and 42 kDa proteins. This work aimed the production of antibodies against those proteins, as well as their ideal dilution for use. Two subcutaneous inoculations were done in rabbits, within a 15-day interval, both with approximately 120mg of the isolated protein, with each rabbit receiving shots with a specific protein, for the production of the antibodies. A First bleeding was performed 21 days after the first inoculation and afterwards, weekly. Western blotting was carried out to confirm the presence of the antibodies and their respective dilutions. The 1:1500 dilution provided the best specificity for the 21, 23 and 31 kDa proteins, whereas for the 26 and 42 kDa proteins, the best dilution was at 1:3000.
Keywords
