فیوژن ژن‌های توکسین اپسیلون و بتا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ Dو B و کلونینگ آن در E.coli

Abstract

طراحی و تولید صحیح و مناسب یک ساختار فیوژن؛ از مهمترین مشکلات در زمینه تولید مقادیر زیاد پروتئین های فانکشنال برخوردار از پیچ خوردگی‌های مناسب است. چنین ساختاری باید دارای کلیه اجزاء مورد نیاز یک ژن واقعی باشد. در صورتیکه ساختار فیوژن به خوبی طراحی شده باشد, می توان آن را در داخل یک میزبان مناسب کلون کرد. کلستریدیوم پرفرینجنز از عوامل مهم بیماری‌زای انسان و دام بوده و تعداد زیادی توکسین از جمله اپسیلون و بتا که مسئول بیماری های شدیدی هستند را تولید میکند. در مطالعه حاضر یک ساختار جدید شامل partial cds ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و partial cds ژن توکسین بتا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ B طراحی شد. در اولین مرحله این ژن ها با استفاده از دو جفت پرایمر آمپلیفای شده و در مرحله دوم با استفاده از پرایمرهای اپسیلون فوروارد و بتا ریورس و با بکار گرفتن قطعه AEAAAKEAAAKAبه عنوان لینکر با یکدیگر فیوز شدند. این کار بر مبنای روش fusion PCR وبا استفاده از آنزیم DNA Pfu پلیمراز که قابلیت تصحیح خطا را دارد انجام شد. قطعه فیوژن پس از اینزرت شدن در پلاسمید pJET1.2blunt در باکتری E.coli سویه TOP10 کلون شد. براساس آخرین اطلاعات موجود این مقاله اولین گزارش در خصوص طراحی و کلونینگ فیوژن ژن اپسیلون- بتا و اولین گزارش در مورد استفاده از استراتژی فیوژن واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در کلستریدیا است که می‌تواند برای توسعه و تکوین یک واکسن نوترکیب از فیوژن پروتئین اپسیلون-بتا استفاده شود. همچنین این ساختار می تواند به عنوان مدلی برای توسعه و تکوین ساختار های جدید فیوژن پروتئین برای سایر پروتئین ها و توکسین‌های بالقوه نیز بکار گرفته شود.

Keywords

• کلستریدیوم پرفرینجنس
• توکسین اپسیلون
• بتاتوکسین
• کلونینگ
• فیوژن واکنش زنجیره‌ای پلیمراز