PERFORMANCE DO DXFLEX NO TESTE DE CROSSMATCH POR CITOMETRIA DE FLUXO

Abstract

Objetivo: Demonstrar a validação e a performance da plataforma de citometria de fluxo DxFlex (Beckman Coulter) no teste de crossmatch por CF pelo protocolo Halifaster, em comparação com a plataforma FACS CANTO II (Becton Dickinson – BD). Materiais e métodos: Inicialmente foi realizada a harmonização dos settings entre os equipamentos DxFLEX e FACS CANTO II, localizados na unidade hospitalar de São Paulo, e o equipamento DxFLEX localizado na unidade Recife. A partir disto, foram realizadas um total de 53 provas cruzadas de linfócitos T (LT) e B (LB), no período de setembro de 2022 a junho de 2023, utilizando sangue periférico de colaboradores voluntários, e soro de pacientes sensibilizados. Os testes foram executados pelo setor de Histocompatibilidade e enviadas ao setor de CF para aquisição no FACS CANTO II e análise no DIVA software (BD) através da escala padronizada de 1024 canais, e aquisição no DxFLEX com análise realizada no software Kaluza (BC) através da escala X – MedBin. As mesmas amostras foram enviadas ao setor de histocompatibilidade da unidade Recife para execução do teste e análise no citômetro DxFlex instalado na unidade. Para a determinação do valor de corte, foram realizadas 24 provas cruzadas contendo soros de pacientes sensibilizados, sem a presença de anticorpos doador específico contra as células de colaboradores doadores voluntários. A partir do resultado do total de 53 provas realizadas em paralelo, foram calculadas a precisão, acurácia, sensibilidade, especificidade do teste, bem como foi avaliado o desempenho da harmonização feita entre as plataformas DxFlex São Paulo e Recife. Resultados: O cutoff obtido foi de 53,18 para linfócitos T e 89,58 para linfócitos B. A análise de precisão foi feita a partir da variação de MCF dos controles negativos, com valores para LT de 244,83 ± 13,73 (CV 6%) e para LB 261,12 ± 26,79 (CV 10%). A acurácia foi medida a partir da correlação de Delta MCF obtidos na plataforma DxFlex em relação ao Canto II, e apresentou valores de R2 = 0,9752 para LT e R2 = 0,959 para LB. Foram obtidos 96% de sensibilidade e 95% de especificidade. A correlação dos resultados entre a plataforma DxFlex São Paulo e Recife foi de R2 = 0,8864 para LT e R2 = 0,881 para LB. Discussão: Foram detectados quatro testes falso-positivos, porém a análise de DSA, revelou a presença DSA em níveis intermediários, o que correlaciona com o resultado obtido na plataforma DxFlex. Foi detectado um teste falso negativo de linfócito B devido ao maior valor de cutoff para linfócitos B em comparação com linfócitos T, devido a interferência dos linfócitos B de memória.A correlação entre as plataformas DxFlex nos diferentes centros apresentou resultados satisfatórios. Conclusão: O DxFlex apresentou resultados satisfatórios e torna-se uma nova plataforma de rotina para o teste de crossmatch por CF.