绿色荧光蛋白标记的CY15瘤细胞眼前房移植瘤早期转移的观察

Abstract

[目的]观察绿色荧光蛋白（GFP）标记的恶性组织细胞增生症CY15细胞在Balb/c鼠眼前房生长及全身转移的规律,探讨GFP作为活细胞标记追踪肿瘤细胞生长、转移的优势并初步探讨肿瘤转移的机制.[方法]将携带绿色荧光蛋白的逆转录病毒MP71-GFP-PRE转入CY15细胞,G418筛选阳性克隆.20只Balb/c小鼠（20只右眼）,手术显微镜下每只小鼠眼前房接种2μL细胞密度为2.0×10^6个/mL的CY15GFP细胞悬液.术后15 d、20 d和30 d分别处死5只小鼠在荧光显微镜下观察全身转移情况.采用流式细胞仪分析术后30 d处死的另外4只小鼠和4只对照小鼠外周血单个核细胞中瘤细胞的比率.[结果]稳定表达绿色荧光蛋白的CY15GFP细胞基本保持了亲代细胞的特征,在前房的成瘤率为100%.术后15 d处死小鼠在荧光显微镜下观察可见肝、肺、胃肠壁等多个脏器中有散在的单个荧光点分布,为转移的单个肿瘤细胞,这些荧光点在肝脏中分布的数量最多.术后20 d、30 d分别处死5只小鼠,发现随着时间的推移这些微小转移灶逐渐增大.流式细胞仪分析术后30 d处死的小鼠外周血单个核细胞中瘤细胞的平均比率为0.048%±0.021%.[结论]绿色荧光蛋白标记瘤细胞后,利用荧光显微镜能有效地观察到肿瘤发生远距离转移在继发脏器中分布的单个瘤细胞和普通显微镜下无法分辨的微小转移灶,这些微小转移灶逐渐增大,为肿瘤转移的克隆起源学说提供了有力的证据.流式细胞仪能准确定量瘤细胞在外周血中的分布情况.

Keywords

• 恶性组织细胞增生症;绿色荧光蛋白;肿瘤转移 眼