Revista Colombiana de Biotecnología (Jan 2006)
Establecimiento de un sistema diagnóstico para la detección de Ralstonia solanacearum y diferenciación genética utilizando marcadores moleculares RAPD
Abstract
Con el propósito de identificar de manera rápida y precisa el agente causal de la marchitez bacteriana de la papa (Ralstonia solanacearum) en tubérculos asintomáticos, se ha desarrollado una prueba diagnóstica basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando iniciadores específicos para amplificar una región 16S rDNA de 292 pb. Para ello se aisló la bacteria a partir de tubérculos de papa y frutos de plátano, empleando técnicas de cultivo, prueba inmunológica y molecular ELISA-NCM y PCR, respectivamente. En tubérculos asintomáticos la PCR detectó la presencia de R. solanacearum en contraste con la ELISA-NCM que no detectó al patógeno. El análisis de polimorfismos de amplificación al azar de ADN (RAPD) permitió diferenciar y agrupar las procedencias de R. solanacearum por regiones geográficas y razas bacterianas, sugiriendo que existen diferencias entre las colectas de acuerdo con su lugar de origen, indicando alta variabilidad genética. Los resultados mostraron que la PCR es una prueba sensible y específica para la detección de R. solanacearum y por lo tanto puede ser implementada como un método de control del patógeno en programas de producción de semilla y certificación de áreas libres de la enfermedad. Según el origen geográfico de las muestras, el patógeno mostró ser genéticamente heterogéneo, dificultando su control en regiones colombianas con problemas fitosanitarios con R. solanacearum en cultivo de papa. Palabras clave: marchitez bacteriana, moko, PCR-16S ADNr, ELISA-NCM, PCR-RAPD.
