Diagnóstico inmunohistoquímico del dengue en cortes de parafina

Abstract

La demostración de antígenos de losvirus del dengue en tejidos de pacientes fallecidos por dengue hemorrágico y particularmente en aquellos casos en los que no se dispone de otras pruebas para confirmar la etiologíaviral, es una necesidad frecuente en nuestro medio. Por esta razón, estandarizamos una técnica inmunohistoquírnica para detectar antígenos de dengue en tejidos incluidos en parafina. Utilizamos anticuerpos antiflavivirus comúnmente usados para el diagnóstico serológico. Los antígenos empleados para estandarizar esta técnica incluyeron: 1) cerebros de ratón inoculados con los diferentes serotipos del dengue y con virus de la fiebre amarilla; 2) cortes de hígados de pacientes fallecidos con diagnóstico clínico de dengue hemorrágico, fiebre amarilla o hepatitis delta; y, 3) monocapas de c6lulas C6136 inoculadas también con los diferentes serotipos del dengue. Estos antígenos se enfrentaron a los anticuerpos antiflavivirus (fiebre amarilla o dengue) preparados como líquidos ascíticos inmunes (MI) de ratón, siguiendo procedimientos ya establecidos. Utilizamos LA1 preparados en el INS y LA1 suministrados por la OPS. Ladilución ideal de trabajocon la cual pudimos 0bse~alra presencia del antígeno, tanto en los tejidos como en las células, se obtuvo titulando los distintos LA1 frente a cortes de tejido desparafinado o frente a las c6lulas fijadas en etanol sobre la lámina de vidrio. Con los LA1 preparados en el INS, O ~ S ~ N ~ re~aOccSión cruzada entre todos los flavivirus, resultado que no se 0bseNó en los cortes de hígado con diagnóstico de hepatitis delta. Los resultados obtenidos con los MI de la OPS permitieron visualizar los antígenos virales más claramente y a diluciones más altas, sin la reacción cruzada entre el dengue y la fiebre amarilla. Sin embargo, la visualización de los mismos con los LA1 del INS es satisfactoria y con disponibilidad permanente. La reacción cruzada entre los virus del dengue y de la fiebre amarilla no es un problema mayor en el tejido porque la histopatología de las dos entidades en el hígado, es muy diferente.