Zhejiang Daxue xuebao. Lixue ban (Sep 2007)

Cloning of mouse R5 gene and vector construction for humanization based on CDR homology(小鼠单抗R5基因的克隆和基于CDR相似性的人源化质粒构建)

  • YUJun-ming(余君铭),
  • GENGJian-guo(耿建国)

DOI
Journal volume & issue
Vol. 34, no. 5
pp. 570 – 575

Abstract

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抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA，逆转录成cDNA，扩增出R5单抗的轻重链基因.分析克隆到的轻重链基因的序列信息，得到互补决定区(CDR)序列信息.构建真核表达质粒并在真核细胞中表达.采用互补决定区移植（CDR-grafting）的方法人源化鼠源单抗R5基因.先从人种系(germline)抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型(CDR canonical structure class)的片段，合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸(overlap extension)的方法得到人源化的VL和VH，并采用双酶切方法分别克隆入昆虫杆状病毒表达栽体pAc-k-CH3中, 经测序确定序列正确.大抽后的质粒和线性杆状病毒DNA共转Sf9昆虫细胞，表达得到的抗体用ELISA能检测到和抗原的结合活性.轻重链基因的成功克隆和人源化表达质粒的构建及表达为下一步改善人源化R5单抗的特性打下了基础，并向R5单抗的抗肿瘤临床应用迈进了一步，具有重要的意义.

Keywords