AVALIAÇÃO DOS COMPOSTOS DE COORDENAÇÃO NAS PROTEÍNAS ENVOLVIDAS NO MECANISMO DE MORTE SOBRE CÉLULAS DE LINHAGEM DE LINFOMA DE BURKITT.

Abstract

Objetivos: O linfoma de Burkitt (LB) é uma neoplasia hematológica das células B, localizada no centro germinativo dos linfonodos. A resistência aos quimioterápicos e a alta toxicidade das terapias atuais são um desafio, especialmente em pacientes idosos e imunocomprometidos. Este estudo visa avaliar a atividade citotóxica de compostos de coordenação em linhagens celulares de LB. Materiais e métodos: Para a avaliação da citotoxicidade dos compostos de coordenação de cobre (II) (compostos 6 e 8) e platina (II) (composto 3) foram realizadas curvas de concentração e tempo resposta em células de linhagem de LB (Daudi) pelo método do MTT. Para isso, as células foram incubadas em diferentes concentrações e tempos, e a concentração inibitória 50% (CI50) foi determinada por meio de regressão linear. A fim de avaliar o mecanismo de morte celular causada pelos compostos 3, 6 e 8, foram empregadas duas metodologias: avaliação da morfologia das células coradas com brometo de etídio (BE) e a laranja de acridina (LA) por microscopia de fluorescência e avaliação da exposição dos resíduos de fosfatidilserina pelo método da Anexina V por citometria de fluxo (CF). A avaliação das proteínas Bax, Bcl-2, AIF, FasR, Caspase-3 ativada, Ki-67, survivina e do potencial de membrana mitocondrial (Δψm) na morte celular causada pelos compostos foi realizada por CF. Resultados: Inicialmente, foi avaliado o efeito citotóxico dos três compostos de coordenação sobre células Daudi para a obtenção da CI50. Nos tempos de 24, 48 e 72h foi observada a CI50 de 3,72 ± 0,17 μM, 3,26 ± 0,27 μM, 6,42 ± 0,48 μM para o composto 3. O composto 6 apresentou CI50 de 74,05 ± 2,70 μM (24h), 10,46 ± 0,40 μM (48h) e 5,15 ± 0,46 μM (72h). Por fim, o composto 8 apresentou CI50 de 6,90 ± 0,39 μM (24h), 32,14 ± 1,42 μM (48h) e 15,37 ± 0,50 μM (72h). Após a incubação com os compostos, foi observado por microscopia perda do volume celular e condensação da cromatina, além de perda da integridade da membrana celular, sinais de apoptose inicial e tardia. Os três compostos também causaram a externalização de resíduos de fosfatidilserina, o que confirma a morte celular por apoptose. Os resultados apresentados para os compostos 3, 6 e 8 mostram que a morte celular causada pelos compostos, envolve a apoptose intrínseca, pois houve aumento da relação Bax/Bcl-2, bem como, aumento da expressão de AIF, após tratamento com os compostos 6 e 8, e perda do Δψm após tratamento com o composto 6 e ativação de caspase-3 após o tratamento com os compostos 3, 6 e 7. Os compostos 6 e 8 também participam da ativação da via extrínseca da apoptose, pois aumentaram a expressão de FasR. A incubação com os compostos também diminuiu a expressão do Ki-67 e da proteína survivina. Discussão: Os compostos avaliados desencadearam morte celular por apoptose intrinseca, evidenciada pela perda do Δψm, aumento da razão Bax/Bcl-2 e da expressão de AIF, e apoptose extrinseca, confirmada pelo aumento de FasR. O aumento da caspase-3, uma caspase efetora, confirma a execução da apoptose. Além disso, os compostos diminuíram a expressão da proteína survivina, que quando aumentada, contribui para resistência celular aos quimioterápicos. Conclusão: A partir do conjunto de resultados apresentados, sugere-se que os compostos são bons candidatos para o desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento do LB.