DANCR在人胚胎干细胞向内胚层分化中的调控功能

Abstract

目的探讨DANCR在人胚胎干细胞（hESC）向内胚层（DE）分化中的作用。方法建立体外诱导hESC向DE分化的体系，检测DANCR的表达水平与DE分化的相关性；利用慢病毒体系敲低hESC的DANCR表达水平，将敲低DANCR的hESC进行DE分化；用qPCR和Western blot方法检测DE分子标志物SOX17和FOXA2，以及原条分子标志物Brachyury （T），EOMES，MIXL1和GSC的表达水平；用Dual luciferase reporter assay和qPCR证明在DE分化过程中DANCR与WNT通路的相互作用。结果体外诱导hESC向DE分化的体系能够有效模拟体内DE分化，DANCR的表达水平随DE分化进程逐渐下降。建立敲低DANCR的hESC细胞株，DANCR表达水平相比对照组显著降低（P < 0.001）。干扰DANCR表达使分化早期的原条分子标志物Brachyury （T），EOMES，MIXL1和GSC，以及分化后期的DE分子标志物 SOX17和FOXA2 的mRNA表达水平相比对照组显著降低（全部P < 0.05）。并且，在DE分化过程中，敲低DANCR组的WNT通路的转录活性相比对照组显著降低（P < 0.05），表现为WNT通路下游基因FZD5，FZD8，SFRP1，FRZB和ANKRD6 mRNA表达水平明显减少（P < 0.05）。然而，敲低DANCR对TGFβ通路的SMAD2/3和p-SMAD2 蛋白表达水平没有显著影响（P > 0.05）。人为激活细胞内β-CATENIN蛋白活性，能够有效回补由于敲低DANCR导致的DE分化缺陷。结论DANCR在DE分化过程中逐渐下调并促进DE分化发生，DANCR可能通过与WNT通路相互作用参与调控hESC向DE分化。

Keywords

• 内胚层;分化;长链非编码RNA;DANCR;WNT信号通路