人神经营养素-3 受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

Abstract

【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C, tyrosine protein kinase C, TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA 中扩增TrkC 基因全长cDNA, 定向克隆于穿梭质粒pShuttle 中, 获得一个带有CMV 启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA ( Adeno-X viral DNA) 体外连接, 形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC 转染人胚肾293 细胞后包装成 有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC)。【结果】TrkC 基因RT-PCR 扩增产物为2 478 bp。Adeno-TrkC 经PCR 鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC 重组腺病毒表达载体, 这为进一步应用 NT-3 进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。