Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Sep 2021)
LncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖
Abstract
目的探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。方法分别研究PVT1，miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别：①空白对照组、si-PVT1（转染PVT1 siRNA）和si-PVT1 NC（转染PVT1 siRNA scramble阴性对照）；②空白对照组、miR-15a（转染miR-15a模拟物）和miR-15a NC（转染miR-15a模拟物的阴性对照）。③空白对照组、si-Bmi-1（转染Bmi-1的siRNA）和si-Bmi-1 NC（转染Bmi-1的siRNA scramble阴性对照）。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系，将HGC-27胃癌细胞株分为3组：空白对照、miR-15a（转染miR-15a模拟物）和miR-15a NC（转染模拟物阴性对照），检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1 与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1 与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上，逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。结果抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后，HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低（P< 0.01）；抑制PVT1后，Bmi-1的表达出现降低，而miR-15a表达增高（P< 0.01）；转染miR-15a后，miR-15a表达升高，而Bmi-1表达出现降低（P< 0.01）。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比，PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低，两者分别下降约56%和32%左右（P< 0.01）。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比，si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降，miR-15a表达升高，在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后，miR-15a表达下降，PVT1 和Bmi-1的表达降低均出现了逆转；而si-PVT1组加入miR-15a后，miR-15a表达升高，在si-PVT1组加入miR-15a之后，miR-15a表达升高，PVT1 和Bmi-1的表达出现进一步下降。结论LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1（lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路），进而促进胃癌细胞的体外增殖。
