Extração de DNA de biópsias de pele fixadas em formalina tamponada e embebidas em parafina e amplificação por PCR

Abstract

Biópsias de pele oriundas dos serviços de diagnóstico da hanseníase podem ser grande fonte de material para estudos retrospectivos em genética humana e do Mycobacterium leprae. No entanto, os procedimentos de fixação e inclusão em parafina podem dificultar a obtenção de DNA de qualidade para amplificação por PCR. Assim, estas amostras requerem protocolos especiais para a extração do material genético. O objetivo deste trabalho é apresentar um método alternativo para extração de DNA com base na combinação de calor e digestão enzimática. Para tanto, os cortes foram aquecidos a 120º C em solução tampão de pH 9,0, submetidos à digestão enzimática com proteinase K e o DNA foi extraído por meio de solução de fenol:clorofórmio:álcool isoamílico. A amplificação por PCR para as regiões dos genes humanos TNF e LTA foi bem sucedida para 85,4% dos espécimes. Considerando o DNA do M. leprae, obtivemos amplificação em 67,6%, 48,5%, 36,7% e 64,8% para os marcadores TA18, GTA9, TTC e RLEP, respectivamente. Concluímos que este é um método de baixo custo que proporcionou um rendimento satisfatório de DNA de boa qualidade para emprego em PCR a partir de biópsias parafinadas de pele.

Keywords

• epidemiologia molecular
• banco de DNA
• PCR
• dermatologia
• hanseníase