Revista Colombiana de Biotecnología (Jan 2002)
Anticuerpos monoclonales contra proteínas de la nucleocápside del virus IBR y su evaluación por ELISA
Abstract
A partir de un aislamiento de una cepa de campo del virus de IBR, se produjeron clonos productores de anticuerpos monoclonales (AcMo)contra componentes de su nucleocápside, para 10 cuallos inóculos para ser descargados en los ratones Balb/c fueron obtenidos del cultivo de la línea celular (MDBK), los cuales se purificaron y concentraron por centrifugaci6n en gradiente continuo de sacarosa al 30% y posterior precipitación por métodos químicos. Las nucleocápsides obtenidas fueron sometidas a SDS-PAGE preparativas al 100%. Se empleó la técnica de ELISA directa como prueba de tamizaje para los sobrenadantes de los hibridomas positivos para la producción de los AcMo. Se obtuvieron ocho hibridomas positivos al virus de IBR por ELISA; cinco fueron positivos por prueba de seroneutralización y por inmunodot; realizada la selección clonal por medio del proceso de dilución límite, se obtuvieron 56 clones positivos al virus de IBR, que reconocen la proteína de 39.8kDa; sus sobrenadantes fueron confirmados por las pruebas de ELISA, Dot y Western Blot. Con los AcMo, se normalizó una técnica de ELISA de captura, que permite detectar tanto la cepa de campo como la cepa de referencia Iowa.
