مجله دانشگاه علوم پزشکی سبزوار (Jan 1970)
بررسی عوامل موثر در تکثیر ژن با واکنش زنجیره ای پلی مراز
Abstract
زمینه و هدف: پیشرفت تکنولوژی موجب اهمیت بخشیدن به روش های نوین تشخیصی و پژوهشی در آزمایشگاه ها شده است و استفاده از روش های جدید تشخیصی در کنار روش های معمول آزمایشگاهی می تواند دقت تشخیص را افزایش دهد که از جنبه های بالینی و روند پی گیری بیماری های ژنتیکی حایز اهمیت است، لذا هدف از این مطالعه بررسی عوامل موثر در تکثیر ژن با واکنش زنجیره ای پلی مراز در جهت ارتقای دقت تشخیص می باشد. مواد و روش ها: این مطالعه از نوع توصیفی تحلیلی است که بر روی 61 نمونه آدنوکارسینومای کولون در بخش سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی سبزوار و اصفهان انجام گرفت. DNA نمونه ها با کیت استاندارد استخراج شد؛ سپس تکثیر قطعه از ژن AURKA و P53 با استفاده از دو زوج پرایمر مخصوص برای هر ژن با غلظت های متفاوت منیزیوم برای واکنش زنجیره ای پولی مراز انجام شد. محصول PCR در ژل آگاروزالکتروفورز گردید. یافته ها: الکتروفورز محصول واکنش زنجیره ای پولی مراز در غلظت 3 و 5 میلی مولار منیزیوم بهتر از 1.5 میلی مولار بود. پرایمر با غلظت یک میکرومولار بهتر از 5 و 10 میکرومولار بود. از دو زوج پرایمر استفاده شده برای تکثیر اگزون 4 ژن AURKA با واکنش زنجیره ای پلی مراز یک زوج آن در نمونه مورد مطالعه بهتر از دیگری بود و از دو زوج پرایمری که برای تکثیر اگزون 5 ژن P53 استفاده شد، یک زوج آن در نمونه های مورد مطالعه بهتر از دیگری بود. نتیجه گیری:نوع پرایمر و غلظت منیزیوم در واکنش زنجیره ای پلی مراز برای Amplify کردن ژن مهم می باشند.
