Revista Colombiana de Biotecnología (Jul 2008)
Esterificación quimioselectiva de fitosteroles de madera mediante lipasas Chemoselective transesterification of wood steroles by lipases
Abstract
La esterificación selectiva de fitosteroles de madera representa una aplicación novedosa de las lipasas, que se inscribe dentro de una plataforma tecnológica de valoración del licor negro en el proceso Kraft. Los fitosteroles de madera son mezclas de esteroles y estanoles (esteroles saturados) donde más del 90% es β-sitosterol y β-sitostanol. Ambos productos tienen mercados potenciales diferentes por lo que el fraccionamiento de los fitosteroles que los contienen implica un valor agregado considerable. Ambas sustancias son muy similares, lo que impide su separación por métodos físicos, siendo la esterificación selectiva de esta mezcla con ésteres de ácidos grasos mediante lipasas quimioselectivas una interesante opción tecnológica para separarlas. Se evaluaron diversas lipasas comerciales en su capacidad de esterificar selectivamente los estanoles, seleccionándose una enzima inmovilizada y una no soportada. Se optimizó el proceso con la enzima inmovilizada obteniéndose grados de esterificación de estanoles por sobre el 90% y de esteroles en torno al 20%, lo que satisface el criterio de selectividad establecido. La enzima inmovilizada comercial tuvo baja estabilidad operacional debido a la desorción de la proteína por lo que se desarrollaron estrategias de inmovilización de la lipasa comercial no soportada, obteniéndose los mejores resultados con butil Sepabeads® como soporte. Con dicho biocatalizador se realizó la reacción de transesterificación en modalidad de lotes repetidos demostrándose la elevada estabilidad de la enzima y comprobándose que es posible realizar cinco lotes productivos sin merma de la conversión ni de la productividad, lo que satisface los criterios de rentabilidad del proceso. La tecnología ha sido transferida al sector productivo y se ha presentado una patente de invención sobre la elaboración del biocatalizador. Palabras clave: lipasa; transesterificación enzimática; ésteres de estanol; enzima inmovilizadaThe chemoselective transesterification of wood sterols is a novel type application of lipases that is considered within a technological platform for the upgrading of black liquor from the Kraft pulping process. Wood sterols are a mixture of sterols and stanols (saturated sterols) in which more than 90% is represented by β-sitosterol and β-sitostanol. Both products are oriented to different markets, representing the fractionation of the wood sterols a significant added value. Both substances are structurally similar which precludes its separation by physical operations, being its fractionation by chemoselective esterification with lipases a very appealing strategy. Several commercial lipases were evaluated in their capacity for the selective transesterification of stanols and two of them were selected: one immobilized and one non-supported. The process was optimized with the immobilized lipase obtaining more than 90% esterification of sterols with around 20% esterification of sterols, which satisfied the criterion of selectivity. The immobilized enzyme was however poorly stable because of protein desorption during the reaction; therefore, several strategies of immobilization of the non-supported lipase were developed, best results being obtained with butyl Sepabeads® as support. The selected biocatalyst was tested in the sequential batch reaction of transesterification, proving that the biocatalyst can be used for five sequential batches with very little loss of activity and insignificant reduction in conversion and productivity, which satisfies the profitability criterion of the process. Key words: Lipase; enzymatic transesterification; wood sterols; stanol esters; immobilized enzyme.
