Vitae (Jan 2007)
DESARROLLO DE LA BIOAUTOGRAFÍA DIRECTA COMO MÉTODO DE REFERENCIA PARA EVALUAR LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LA GENTAMICINA CONTRA Escherichia coli DEVELOPMENT OF DIRECT BIOAUTOGRAPHY AS REFERENCE METHOD FOR TESTING ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF GENTAMICIN AGAINST Escherichia coli
Abstract
La bioautografía es una técnica sencilla y rápida que combina las ventajas de la cromatografía en capa fina y la detección de actividad antimicrobiana, logrando visualizar directamente la(s) fracción(es) con actividad antimicrobiana. Determinar la eficacia de esta técnica puede facilitar el panorama en el aislamiento de sustancias antimicrobianas presentes en mezclas complejas. El trabajo descrito es un avance para evaluar si la técnica permite cuantificar la actividad antimicrobiana empleando como referencia el aminoglicósido Gentamicina® y su actividad contra el microorganismo patógeno Escherichia coli (E.coli). La cuantificación de la actividad antimicrobiana se verifica al medir el diámetro del halo de difusión que se genera al aplicar soluciones de diferentes concentraciones de Gentamicina sobre placas cromatográficas; al determinar luego el efecto del volumen aplicado sobre la variabilidad de los resultados y finalmente al analizar las diferencias entre los halos de difusión y de inhibición microbiana. En el presente estudio se encuentra que la difusión del antibiótico sobre las placas es un factor determinante para cuantificar, y que existe un rango de concentraciones donde la fuerte interacción entre las variables aludidas permite predecir que se cuenta con un método validable para detectar y cuantificar la actividad antimicrobiana, sobre todo en mezclas complejas.Bioautography is a fast and simple technique which combines the advantages of thin layer chromatography separation and antimicrobial activity detection. This technique displays directly antimicrobial fraction spots from a mixture. Efficacy determination of the technique improves the isolation of antimicrobial substances from complex mixtures. This article describes how bioautography is useful to quantify antimicrobial activity of amino glycoside gentamicin, against pathogen Escherichia coli (E. coli). Quantitative analysis is verified measuring diffusion halos diameters and applying different concentrations of gentamicin on tlc plates. Volume effect is measured on variability of results. Differences between diffusion halos and microbial inhibition are analyzed too. Results show how antibiotic diffusion on tlc plates is a determining factor, and there is a concentration range where strong interactions between measured variables led to establish a method to be validated for detecting and quantifying antimicrobial substances from complex mixtures.
