Acta Biológica Colombiana (May 2011)
Extracción de enzimas pécticas del epicarpio del lulo (Solanum quitoense) involucradas en el proceso de ablandamiento.
Abstract
Durante el periodo de poscosecha, al aplicar diferentes técnicas de conservación en fresco, el lulo (Solanum quitoense) sufre de ablandamiento que contribuye con el deterioro del fruto debido a la actividad de las enzimas pécticas que atacan la red estructural de la pared vegetal. Esta investigación se basó en la búsqueda de las mejores condiciones de extracción y medida de actividad de las enzimas Pectinesterasa, Poligalacturonasa y Pectatoliasa; Se encontró que las dos primeras enzimas pueden ser extraídas simultáneamente con buffer Fosfatos 20mM pH 7,0 + NaCl 0,06M y 60 minutos de extracción, relación 1:2 (material vegetal:buffer de extracción), a su vez, la Pectatoliasa se extrajo con buffer Fosfatos 20mM pH 7,0+ cisteína 20mM y 30 minutos de extracción, relación 1:3. Para la cuantificación de la actividad Pectinesterasa es necesario incubar 15 minutos a 42°C 2500mL de extracto enzimático crudo (EE) en buffer Fosfatos 20mM pH 7,0 + NaCl 0,15M y 1,6% de Pectina Cítrica como sustrato, con valores de Km aparente de 3,78% de PC y Vmax 17,95 mmolH+/min*mgprot. Para la cuantificación de la actividad Poligalacturonasa es necesario incubar 15 minutos a 37°C 30mL (EE) en buffer Acetatos 200mM pH 4,5+NaCl 0,25M y 1,0% de APG como sustrato, con valores de Km aparente 0,141% de APG y Vmax 28,46nKat/s*mgprot. Para la cuantificación de la actividad Pectatoliasa es necesario incubar 2 minutos a 17°C 100mL (EE) en buffer TRIS:HCl 50Mm pH 8,5+CaCl2 4mM y 0,1% de ÁPG como sustrato, con valores de Km aparente 0,0865% de APG y Vmax 82,75mg/s*mgprot.
