Vitae (Apr 2011)
VALIDACIÓN INTRALABORATORIO DE UNA METODOLOGÍA ANALÍTICA POR ESPECTROFOTOMETRÍA UV/VIS PARA EVALUAR EL POTENCIAL IRRITANTE OCULAR DE TENSOACTIVOS EN GLÓBULOS ROJOS INTRALABORATORY VALIDATION OF AN ANALYTICAL METHODOLOGY BY UV/VIS SPECTROMETRY IN ORDER TO EVALUATE THE OCULAR IRRITANT POTENTIAL OF TENSOACTIVES IN RED BLOOD CELLS
Abstract
Se presentan los resultados de la validación intralaboratorio para los parámetros de linealidad, repetibilidad y precisión intermedia del ensayo en glóbulos rojos, metodología in vitro empleada para evaluar la irritación ocular. Este ensayo evaluó los efectos nocivos de los tensoactivos sobre membranas y proteínas celulares, y constituye así una alternativa al test de Draize. A través de espectrofotometría UV/VIS a 577 nm se midió la hemoglobina liberada tras la lisis de los glóbulos rojos, estimando la concentración hemolítica 50 (CH50), que constituye un indicador del daño celular ocasionado por el tensoactivo. El ensayo también consideró la desnaturalización de hemoglobina, causada por altas concentraciones del tensoactivo, por la relación de absorbancias a 542 y 577 nm, estimando el índice de desnaturalización (ID). La relación CH50/ID es un indicador cuantitativo del potencial irritante del dodecilsulfato de sodio (SDS), surfactante con el que se validó este ensayo. Se logró la validación de los parámetros señalados y se ofrece una metodología confiable y de fácil ejecución, alternativa al uso de animales, para evaluar la irritación ocular de tensoactivos.Red blood cell assay (RBC) intralaboratory validation was presented, specifically for linearity, repeatability and intermediate precision. RBC is an in vitro methodology employed for ocular irritation evaluation measuring surfactants adverse effects on cell membranes and proteins and is an alternative for Draize ocular test. Free hemoglobin after red blood cell lysis was determined through spectrometry at 577 nm in order to estimate medium hemolytic concentration (HC50) indicating cell damage by surfactant. Also hemoglobin denaturation induced by high concentrations of surfactants was considered measuring denaturation index (DI) through absorbance ratio at 542 and 577 determinations. HC50 / DI is an indicator of the dodecylsulphate (SDS) irritant potential, surfactant used in order to validate this assay. Parameters previously mentioned were validated and we present an easy and reliable alternative methodology for animal experimentation to assess surfactants ocular irritation for SDS.
