Reactividad IgE de una proteína multi-epítope recombinante diseñada a partir de alérgenos de interés en el trópico - hallazgos preliminares

Abstract

Objetivo: Diseñar una proteína multiepítope a partir de alérgenos de A. lumbricoides y APD; y evaluar preliminarmente su reactividad IgE. Métodos: Mediante herramientas computacionales se diseñó In Silico, una molécula que contiene múltiples epítopos T, de alérgenos derivados de A. lumbricoides y APD. Esta proteína multiepítope (MP1) se expresó utilizando un sistema de E. coli, y se purificó mediante cromatografía de afinidad, empleando agarosa Ni-NTA. La reactividad IgE anti-MP1 y anti-extracto de APD, se evaluó mediante Dot-Blot y ELISA indirecta, a partir de suero de pacientes alérgicos a APD, e individuos no alérgicos procedentes de Barranquilla, Colombia. Los individuos alérgicos contaron con prueba cutánea positiva a una batería estandarizada de alérgenos inhalados (EUROLINE - Ref: DP 3704-1601-1 E) e IgE específica para ácaros. Resultados: La proteína multiepítope MP1 se expresó y purificó con alta pureza. El resultado del Dot-Blot, mostró que todos los sueros de pacientes alérgicos tuvieron una reactividad IgE menor a MP1 en comparación al extracto de APD. Por ELISA, se observaron concentraciones significativamente menores de IgE anti-MP1 (Mediana: 270,86 ng/ml; RIQ: 90,3), en contraste a los niveles de IgE anti-APD (Mediana: 988,5 ng/ml; RIQ: 1117,6), en suero de pacientes alérgicos a APD. Conclusiones: Se diseñó, expresó y purificó una proteína compuesta por múltiples epítopes de alérgenos de A. lumbricoides y APD. Los resultados preliminares de Dot-Blot sugieren que esta molécula muestra propiedad hipoalergénica con una reactividad IgE muy baja, en comparación con el extracto de ácaros. Se necesita continuar con estudios funcionales para comprender mejor la respuesta inmune inducida por esta molécula.

Keywords

• Alergia
• Alérgenos
• Ácaros del polvo doméstico
• Epitopes T
• Multi-epitopes
• Ascaris lumbricoides