ESTUDOS DE CARACTERIZAÇÃO E APLICAÇÃO DE LIPOSSOMAS ASSOCIADOS À PEPTÍDEOS ANTIFÚNGICOS DERIVADOS DA HISTATINA-5 VISANDO O COMBATE DE CANDIDA ALBICANS

Abstract

Introdução: A Candida albicans é um fungo dimórfico de maior prevalência na cavidade oral e a principal espécie causadora de candidíase. Em parte, as ações patogênicas de Candida albicans devem-se a formação dos biofilmes, uma matriz polimérica extracelular e responsável pela virulência deste microrganismo. Na cavidade oral essa matriz pode ser inibida por meio de peptídeos antimicrobianos, como histatina-5, que agem nas células planctônicas de Candida albicans e impedem a formação dos biofilmes. No entanto, a histatina-5 possui rápida degradação enzimática o que diminui o seu potencial de ação nos biofilmes já formados. Neste contexto, o objetivo do estudo foi associar histatina-5 a lipossomas PEGuilados para inibir a virulência formada por biofilmes de Candida albicans e proteger o peptídeo de ações enzimáticas. Métodos: Para síntese de peptídeo foi aplicado o método de síntese em fase sólida e realizada a purificação por cromatografia de alta eficiência. Com o peptídeo purificado foi realizada associação do peptídeo ao lipossoma PEGuilado por método de evaporação em fase reversa sendo quantificado o peptídeo ao lipossoma por ultracentrifugação seguida da análise em espectrofluorímetro. Os ensaios microbiológicos do peptídeo 0Whistatina-5 foram realizados através da concentração inibitória mínima e a associação do lipossoma PEGuilado observada por meio da viabilidade celular por resazurina (AlamarBlue®). Resultados e discussão: O método de síntese de peptídeo em fase sólida apresentou rendimento bruto satisfatório (74 %). O grau de pureza do peptídeo foi superior a 90 %, sendo ideal para confiabilidade da atividade do peptídeo. A adição de triptofano a histatina-5 permitiu a análise da associação ao lipossoma PEGuilado o qual gerou 88,65 % de eficiência, dado fundamental para a atividade do peptídeo. Para os ensaios microbiológicas foi observado que 80 μmol/L do peptídeo gerou 8,98 % de inibição. Ao associar 100 μmol/L do peptídeo no lipossoma PEGuilado foi analisado que a viabilidade celular manteve-se a 65 %, enquanto o peptídeo na mesma concentração não associado manteve a viabilidade celular em 70 % resultado indicativo de estabilidade na atividade do peptídeo. Conclusão: A associação do peptídeo 0Whistatina-5 ao lipossoma PEGuilado permitiu a atividade fungistática do peptídeo, porém novos estudos devem ser realizados para o desenvolvimento antibiofilme do derivado de histatina-5.

Keywords

• Lipossomas PEGuilados Biofilme Peptídeo Antimicrobiano