ANÁLISE DO MICROBIOMA EM ÚLCERA DE PERNA DE PACIENTES COM ANEMIA FALCIFORME

Abstract

Introdução: As úlceras de perna (UP) na doença falciforme (DF) são relativamente comuns, dolorosas e persistentes. A microbiota presente em UP de indivíduos com DF não é conhecida. Objetivo: descreve a microbiota da UP em pacientes com DF e comparar com a microbiota presente na pele integra. Métodos: De junho de 2017 a abril de 2019, 87 pacientes HbSS do Hemocentro de Belo Horizonte (Fundação Hemominas) e 30 participantes saudáveis foram inscritos, pareados por sexo e idade. Quatro grupos de amostras foram obtidas: caso 1 - UP; caso 2 - pele íntegra de pacientes com UP; controle 1 - pele íntegra de pacientes com DF e sem histórico de UP; e controle 2 - pele íntegra de participantes sem DF e sem histórico de outras doenças crônicas. O DNA bacteriano foi extraído utilizando o FastDNA™ Spin Kit (MP Biomedicals) e a amplificação do domínio V4 do gene 16S RNAr foi realizada. As amostras foram quantificadas com o fluorímetro Qubit®2.0 (InvitrogenTM) e a biblioteca foi realizada pelo Ion Chef System. O sequenciamento conduzido pela plataforma Ion Torrent e as sequências analisadas pelo QIIME 2. As métricas das diversidades alfa (OTUs, uniformidade de Pielou, Shannon, Simpson, Chao1 e diversidade filogenética de Faith) e beta (Jaccard, Bray-Curtis, UniFrac não ponderada e UniFrac ponderada) foram estimadas por Kruskal-Wallis e PERMANOVA, respectivamente. Além disso, realizou-se análise de abundância diferencial (ANCOM). Resultados: Foram sequenciadas 84 amostras, sendo 22 amostras de UP, 17 de pele íntegra de pacientes com UP, 23 de pele íntegra de paciente HbSS sem história de UP e 22 de pele íntegra do participante sem DF e outras doenças crônicas. Diferenças estatísticas foram encontradas entre amostras dos diferentes grupos para a diversidade alfa (p < 0,05), com exceção das amostras de pele íntegra dos pacientes DF com UP e sem UP. A diversidade pelo índice de Pielou não apresentou diferenças estatisticamente significativas entre os grupos de pele íntegra. Na diversidade beta, diferenças estatísticas foram observadas (p < 0,05), exceto na comparação da pele íntegra dos pacientes com UP e a dos pacientes sem história de UP pelo índice de Unifrac ponderada. Dos 38 filos de bactérias identificados, os de maior abundância foram Proteobacteria, Firmicutes e Actinobacteria. Na comparação entre as peles íntegras, diferenças significativas foram encontradas na abundância do filo OP3 (p = 0,01890; p = 0,04890) para a pele íntegra dos pacientes com e sem UP e entre a pele íntegra dos pacientes sem UP e dos controles sem história de doenças crônicas, respectivamente. As diferenças também foram observadas nas abundâncias dos filos FBP (p = 0,01560), Nitrospirae (p = 0,00799) e SBR1093 (p = 0,00697) para a pele íntegra dos pacientes com UP e dos sem histórico de doenças crônicas. A espécie Kocuria palustris apresentou maior abundância nas UP (86%). Discussão: O microbioma contribui no equilíbrio da saúde humana e são raros os estudo que o correlacionam com as úlceras de perna na AF. Houve diferenças significativas na microbioma presente na LU e pele íntegra, sugerindo que a microbiota pode contribuir para a persistência da ferida, podendo ser alvo de tratamentos. Conclusão: Nosso estudo mostrou diferenças na diversidade microbiana das UP quando comparada com a pele íntegra. Além disso, descreveu-se pela primeira vez maior abundância da espécie Kocuria palustris na UP, sugerindo associação com a persistência da ferida.