مجله دانشگاه علوم پزشکی سبزوار (Apr 2020)
زیر همسانه سازی و بیان ژن SO9 گیاه غاسول صابونی در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری
Abstract
: غاسول صابونی دارای ایزوفرم های مختلف پروتئین ساپورین می باشد. ساپورین جزء پروتئین های غیر فعال کننده ریبوزومی (RIPs) است. ایزوفرم SO9 ساپورین ها، آدنین 4324 موجود در توالی حفاظت شده GAGA را دپورینه کرده و باعث اختلال در پروتئین سازی می‌گردد. در این مطالعه بیان ایزوفرم SO9 در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری انجام شد. روش بررسی: ژن SO9 سنتز شده، از پلاسمید pUC57-SO9 نوترکیب توسط آنزیم های محدود کننده BamH1 و Sal1 جدا و در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه سازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با IPTG القا گردید. پروتئین SO9 نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل خالص سازی شد. برای تایید پروتئین نوترکیب از تکنیک Western blotting استفاده شد. واکسیناسیون موش های سوری با پروتئین تخلیص شده به صورت صفاقی انجام و تیتر IgG سرم به وسیله ELISA بررسی شد.نتایج: زیر همسانه سازی ژن SO9 در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله واکنش PCR و هضم آنزیمی تایید شد. حضور باند پروتئینی 29 کیلودالتون در SDS-PAGE، بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. پروتئین نوترکیب SO9 به وسیله آنتی بادی پلی کلونال شناسایی شد. بعد از تزریق پروتئین در گروه های تست نسبت به گروه های کنترل، میزان تیتر آنتی بادی تولید شده به وسیله تست ELISA اندازه گیری شد.نتیجه گیری: خاصیت ادجوانتی و ایمنوژنی آنتی ژن SO9 نوترکیب تخلیص شده سبب می‌شود که از این آنتی بادی برای شناسایی میزان حضور SO9 در گیاه غاسول صابونی، به عنوان کاندید واکسن، تهیه کیت تشخیصی و در مطالعات ضد سرطانی سلول های انسانی استفاده گردد.
