Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Jan 2002)
人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
Abstract
【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA, 进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-C1-β 。 【结论】成功构建人pol-β 基因全长cDNA 真核表达载体, 为进一步建立该基因的高表达细胞株提供基础。
