重组野生型 p53 基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

Abstract

目的: 将外源性野生型 p53 基因导入人骨肉瘤细胞株, 研究野生型 p53 蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法: 用 DNA 转染技术将 7 重组野生型 p53 基因 PM 47质粒导入人骨肉瘤细胞株 HOS-8603中, 用 PCR 技术监测外源性 p53 基因 在瘤细胞中存在的稳定性; 用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中 p53 的表达情况; 用相差显微镜去观察凋亡瘤 细胞的形态特点; 用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果: 成功地将重组野性型 p53 基因 PM 47 质粒导 入人骨肉瘤细胞株 HOS-8603中 ,在 gpt 选择培养基中培养两周后, 分离生长出阳性细胞克隆; 经 PCR 证实外源性 p53 基因在 瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代; 当向培养液中加入 1 μ mol/L 地塞松(Dex)后,8 h 即可用免疫组化方法检 测到 p53蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变,转染后的瘤细胞凋亡率高达 90%。结论: 当人骨肉瘤 细胞株中重组野生型 p53 基因诱导过表达时,瘤细胞呈现凋亡, 本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。