Tecnología en Marcha (Apr 2017)
Establecimiento de callogénesis somática en Plantago major e identificación de compuestos con actividad biológica
Abstract
Ante el creciente interés en el aprovechamiento de las propiedades de las plantas medicinales, el estudio de compuestos bioactivos de las mismas se convierte en un campo de investigación interesante y novedoso, con el cual se busca relacionar y comprender la sinergia entre las sustancias naturales y su impacto positivo sobre la salud humana. Una importante utilidad del establecimiento de cultivos celulares es justamente que éstos ofrecen la oportunidad de analizar a nivel bioquímico el aprovechamiento industrial o clínico que tiene una determinada especie debido a la presencia de ciertos compuestos en sus órganos, con la posibilidad de producirlos a nivel celular e in vitro. En este trabajo se logró la inducción de callogénesis somática partir de la germinación de semillas in vitro de Plantago major, las cuales fueron desinfectadas utilizando un protocolo previamente establecido. Luego se tomaron explantes de hoja (1.0-1,5 cm2) de las vitro plantas y fueron cultivados en medio semi–sólido (M&S), para lo cual se generó una matriz de 28 tratamientos que combinaban diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento (2,4-D y TDZ) en medio M&S. A partir de esta matriz se seleccionaron 3 medios de cultivo (M14, M27 y M28) con los mejores resultados tanto en la inducción de callogénesis como para embriogénesis somática. Para la identificación y cuantificación de los compuestos bioactivos presentes en los extractos liofilizados de callos, se realizaron análisis de dos estándares para comprobar su efectividad como marcadores químicos en la cuantificación de verbascósidos e iridoides con base en aucubina en P. major. Los extractos hidro-alcohólicos crudos de P. major, fueron elaborados según los protocolos establecidos por la empresa Laboratorios Lisan. Los mismos se prepararon en una concentración de 10% p/v utilizando etanol al 95%. Con el análisis mediante HPLC para ambos marcadores se generaron señales con línea base estable y buena resolución, siendo más efectivo el de verbascósido, por lo que se continuó con las pruebas necesarias para lograr establecer un protocolo de cuantificación en extractos provenientes de los callos generados. La metodología establecida para la detección y cuantificación de los metabolitos bioactivos en este sistema de callogénesis somática, aún debe ser depurada con base en un solvente de extracción que otorgue estabilidad a los extractos en un período de tiempo determinado.
Keywords
