Determinación por Cromatografía Líquida de Alta Resolución de 5-bromo-4-cloro-3-indolil-b -D-galactopiranósido (Xgal) y los intermediarios de su síntesis

Abstract

En microbiología, los indicadores de microorganismos son muy utilizados en la determinación de la calidad de diferentes productos entre los cuales se destacan el agua y los alimentos, donde los coliformes, especialmente de E. coli se han identificado. Entre estos indicadores se destacan los derivados de indoles, que tienen la propiedad de comportarse como un sustrato cromogénico. Uno de estos es el 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido (Xgal) y se emplea como componente de los medios de diagnóstico microbiológicos. Se obtiene mediante la síntesis química y en presencia de coliformes productores de la enzima β-galactosidasa muestra una coloración azul índigo, por tal motivo es empleado en la identificación y cuantificación de estos microorganismos. En este trabajo, se reporta el desarrollo y validación de una técnica analítica por HPLC que permite evaluar la calidad del producto final y de los intermediarios que se obtienen en cada etapa de síntesis. Con el empleo de una columna de fase reversa y de una fase móvil compuesta por una disolución estabilizadora de fosfato pH 3 y acetonitrilo, así como la utilización de un gradiente de elución, se logró separar el 5-bromo-4-cloro -3-indolil-β-D-galactopiranósido de cada uno de sus intermedios de la síntesis. El método desarrollado tiene un límite de detección del 0,2 al 0,5 % y un límite de cuantificación del 1,0 al 2,0 %, el cual es aceptable si se tiene en cuenta que el Xgal se utiliza como un reactivo de diagnóstico.