PCR-SSP tekniğine dayalı laboratuvar yapımı HLA-B*27 optimizasyonu ve test kiti geliştirilmesi

Abstract

AAmaç: Çalışmada Ankilozan spondilit ve diğer spondiloartropatilerin moleküler tanısında kullanılmak üzere güvenilir, ekonomik ve rutin kullanıma uygun laboratuvar yapımı (in-house) HLA-B*27 PCR-SSP tanı kiti geliştirilmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmaya, ticari kitler kullanılarak HLA-B*27 pozitif olarak saptanan 119 ve negatif olarak saptanan 446 olmak üzere toplam 565 olgu dahil edildi. HLA-B*27 tipleme için sekansa spesifik primerler ve beta globin gen bölgesinden yararlanılarak dizayn edilen internal kontrol primer çifti kullanılarak PCR optimizasyonu gerçekleştirildi. Bulgular: HLA-B*27’si pozitif olan olgularda, %2’lik agaroz jelinde 273 bç internal kontrol bandının ilerisinde 149 bç’lik spesifik bant olmak üzere çift bant, B*27 negatif hastalarda ise sadece 273 bç’lik internal kontrol bandı saptandı. Ticari kitler kullanılarak HLA-B*27’si pozitif olarak saptanan 119 ve negatif olarak saptanan 446 bireyin sonuçları ile tarafımızdan geliştirilen PCR-SSP kiti kullanılarak elde edilen sonuçların tamamen uyumlu olması nedeniyle sensitivite ve spesifite %100 olarak belirlendi. Geliştirdiğimiz laboratuvar yapımı PCR-SSP kitinin maliyetinin, ticari kitlere göre en az 50 kat daha ucuz olduğu görüldü. Sonuç: Ticari kitler kullanılarak HLA-B*27’si pozitif olarak saptanan 119 ve negatif olarak saptanan 446 olgunun tamamında, geliştirdiğimiz yöntemle de birebir uyumlu sonuçlar elde edildi. Bu bulgular geliştirdiğimiz kitin güvenilir, ekonomik ve rutin kullanıma uygun olduğunu göstermektedir.

Keywords

• hla-b*27
• pcr-ssp
• test kit development
• ankylosing spondylitis
• spondyloarthropathies
• hla-b*27
• pcr-ssp
• test kiti geliştirilmesi
• ankilozan spondilit
• spondiloartropatiler