Archives of Razi Institute (Jul 2008)
کلونینگ ژن ROP1 توکسو پلاسما گوندی (RH) در وکتور بیانی
Abstract
توکسو پلاسما گوندی دارای آنتی ژنهای ایمنوژنیک متعددی است. مهمترین آنتی ژنهای توکسو پلاسما آنتی ژنهای سوماتیک و دفعی- ترشحی می باشند. پروتیئن های راپتری به عنوان آنتی ژن دفعی- ترشحی شناخته می شوند. این آنتی ژنها برای ساخت واکسن بر علیه توکسو پلاسموزیس کاندیدا هستند. هدف اصلی این مطالعه کلون کردن ژنROP1 توکسو پلاسما گوندی (RH) در وکتور کلونینگ مناسب به منظور آنالیز ژن و استفاده از آن برای مطالعات بعدی تولید پروتئین بود. تاکی زوئیت های سویه RH توکسو پلاسما گوندی از مایع صفاقی موشهای آلوده به انگل جمع آوری شد. DNA ژنومی به روش فنل-کلروفرم استخراج گردید. قطعه 1 ROPبا پرایمرهای اختصاصی تکییر شد. محصول PCR خالص شده بین سایتهای EcoR1 وBamH1 وکتور pTZ57R/T قرار گرفت و در سویه TG1 اشریشیا کلی ترانسفرم گردید و توسطIPTG و X-Gal غربالگری شد. پلاسمید طراحی شده استخراج گردید و بعد از الکتروفورز با اشعه UV مشاهده گردید.قطعه تکثیر شده با موفقیت در وکتور pTZ57R/T کلون شد. صحیح قرار گرفتن قطعه ROP1 در پلاسمید طراحی شده توسط آنزیم های برش دهنده و sequencing بررسی گردید. بعد از برش، قطعه ای حدودbp 760 ازپلاسمید جدا شد که بعد از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز مشاهده گردید. توالی ژن تکثیر یافته نشان دهنده هومولوژی بیش از 96% با ژن مورد نظر در GenBank بود.
Keywords
