Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Jul 2025)
甲硫氨酸亚砜还原酶A在肾透明细胞癌侵袭转移中的作用机制
Abstract
目的本研究旨通过细胞学和动物实验验证甲硫氨酸亚砜还原酶A（MSRA）对肾透明细胞癌（ccRCC）增殖、凋亡、侵袭和转移的影响，揭示其潜在的生物学机制，为ccRCC的治疗提供新的分子靶点和策略。方法利用转染实验构建MSRA过表达细胞株；通过细胞增殖实验、平板克隆实验、凋亡实验、划痕实验、侵袭实验评估MSRA对ccRCC细胞增殖、凋亡、侵袭和转移的影响；并进一步通过ROS检测，RT-qPCR、Western blot实验探讨其作用机制及相关信号通路；随后，利用裸鼠皮下移植瘤模型在动物水平上验证MSRA对ccRCC肿瘤生长和转移的影响，并初步探索其潜在的分子机制。结果OS-RC-2和786-O细胞株MSRA mRNA水平和蛋白表达量较低（RT-qPCR：0.57±0.09，0.56±0.04；WB：0.26 ±0.13，0.24±0.09）；RT-qPCR和Western blot实验提示成功构建了OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（RT-qPCR：108.04±1.80；WB：117.01±20.19）和786-O-pLVSO2-MSRA（973.45±51.37，WB：190.34±30.13）过表达细胞株，差异具有统计学意义（P＜0.001）；增殖实验提示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（72 h：1.246±0.003）和786-O-pLVSO2-MSRA（72 h：1.468±0.001）增殖活力降低，差异具有统计学意义（P＜0.001）；平板克隆实验提示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（0.090±0.002）和786-O-pLVSO2-MSRA（0.080±0.002）克隆数减少，差异具有统计学意义（P＜0.001）；凋亡实验提示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（2.013±0.116）和786-O-pLVSO2-MSRA（4.767±0.199）凋亡率增加，差异具有统计学意义（P＜0.001）；划痕实验提示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（0.643±0.028）和786-O-pLVSO2-MSRA（0.603±0.034）迁移距离较少，差异具有统计学意义（P＜0.001）；Transwell实验提示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（16.80 ±2.28）和786-O-pLVSO2-MSRA（21.40±4.78）穿透细胞数减少，差异具有统计学意义（P＜0.001）；荧光实验显示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA（50.59±6.24）和786-O-pLVSO2-MSRA（62.87±5.35）活性氧含量降低，差异具有统计学意义（P＜0.001）；Western blot实验显示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA和786-O-pLVSO2-MSRA中N-cadherin和Vimentin的表达量下降，而E-cadherin的表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.001）；Western blot实验显示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA和786-O-pLVSO2-MSRA中p-ERK1/2和p-SMAD3的表达量下降，差异具有统计学意义（P＜0.001）；动物实验提示OS-RC-2-pLVSO2-MSRA肿瘤体积降低（155.00±50.46），差异具有统计学意义（P＜0.001）；动物组织Western blot实验提示N-cadherin和Vimentin的表达量下降，而E-cadherin的表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.001）；OS-RC-2-pLVSO2-MSRA中IHC实验提示Ki-67、N-cadherin和Vimentin的表达量下降，而E-cadherin的表达量增加，差异具有统计学意义（P＜0.001）。结论表达MSRA抑制ccRCCROS的表达，抑制EMT过程，进而抑制ccRCC的增殖、侵袭和转移。
