RECONHECIMENTO DE LLA PH-LIKE COM A INTEGRAÇÃO DOS MÉTODOS DIAGNÓSTICOS: EXPERIÊNCIA EM PEDIATRIA

Abstract

Objetivo: A leucemia linfoide aguda de precursor B (LLA-B) apresenta marcadores citogenetico-moleculares com impacto prognostico bem definidos. A LLA Ph-Like é um subgrupo geneticamente heterogêneo, classicamente de linhagem B, caracterizado pela hiperexpressão do gene CRFL2, em 50% dos casos, e por rearranjos gênicos e mutações com desregulação das vias de sinalização JAK/STAT, e hiperativação das vias de tirosinaquinase. Em países em desenvolvimento, o maior desafio para esse subgrupo ainda está relacionado ao acesso às técnicas para o diagnóstico preciso. A citometria de fluxo (CF) e de extrema importância no diagnóstico de LLA, na determinação de doença residual mínima e na busca de marcadores para alvo terapêutico. A hiperexpressão de CRLF2 pode ser investigada por CF e os rearranjos com CRLF2, através de diferentes métodos moleculares como RT-PCR, FISH e sequenciamento de nova geração (NGS). Descrevemos nossa experiencia no diagnóstico de LLA Ph-Like, com a triagem pela hiperexpressão de CRLF2 na CF. Material e método: Estudo retrospectivo de revisão de pacientes de uma única instituição com diagnóstico de LLA e hiperexpressão de CRLF2 (102-103) por CF, associado a alterações no gene CRLF2 confirmados por teste molecular. Resultados: No período de abril/2015 a maio/2023, a expressão celular de CRLF2 foi analisada por CF em 145 casos de LLA; as análises foram realizadas em toda população, incluindo os casos com Síndrome de Down (SD), como controle positivo. Cinco pacientes apresentaram hiperexpressão de CRLF2; destes, dois com SD, sendo um caso com rearranjo CRLF2::P2RY8 e outro sem avaliação molecular devido ausência de material disponível. Os outros três pacientes, não SD, correspondentes à 2% da amostragem, também apresentaram o rearranjo CRLF2::P2RY8 detectado por NGS ou RT-PCR, confirmando o diagnóstico de LLA Ph-Like. Os três casos com hiperexpressão de CRLF2 na CF e rearranjo CRLF2::P2RY8, apresentaram os seguintes imunofenótipos: LLA-B comum, LAFM B/mieloide e LLA pré-B; não foram encontradas outras alterações geneticomoleculares em nenhum dos casos; todos apresentaram DRM negativa ao final da indução; dois estão vivos sem doença e um caso ainda em tratamento. Discussão e conclusão: A correlação entre imunofenotipagem e perfil genético-molecular define subtipos distintos de LLA, com impacto nas decisões terapêuticas e prognóstico. A CF é um método rápido, fácil e de baixo custo para detecção de hiperexpressão de CRLF2, factível de ser incorporada na prática clínica como preditor de alterações genéticas e subtipos moleculares, na suspeita de espectro de LLA Ph-like. Portanto, a pesquisa da hiperexpressão de CRLF2 por CF poderia ser incorporada ao painel imunofenotípico diagnóstico como ferramenta de screening, para suspeita na identificação com maior rapidez do subgrupo Ph-like, além da perspectiva futura de possível alvo terapêutico.