Revista Espanola de Enfermedades Digestivas (Jul 2005)
Antisense gene therapy using anti-k-ras and antitelomerase oligonucleotides in colorectal cancer Eficacia de la terapia génica antisentido utilizando oligonucleótidos anti K-ras y antitelomerasa en cáncer colorrectal
Abstract
Aim: to test the efficacy of anti-k-ras and antitelomerase oligonucleotides for disabling colorectal cancer cell growth. Material and methods: an established human colorectal cancer cell line (SW 480, ATTC®) was used. Oligodeoxiribonucleotides (ODNs) have a phosphorotioate modification to ensure intracellular intake. We used an antitelomerase ODN (Telp5) and two anti-k-ras ODNs (AS-KRAS and ISIS). AS-KRAS is designed to join the k-ras oncogene's exon 1. ISIS links to the terminal transcription unit 5' of k-ras. Telp5 joins the template region of the hTR telomerase subunit. ODNs have been tested in different concentrations (1, 5, 10, 20 micromolar). Cell viability has been tested at 48 and 72 hours. Statistical analysis and graphic design were made with the statistical package "Analyzing Data with GraphPad Prism-1999", GraphPad Sofware Inc., San Diego CA©. We used the Student's t test for statistical analysis. Results: the lowest dose (1 µM) was not effective. Using the highest dose (20 mM for 48 hours) of combined AS-KRAS and Telp5 cell viability decreased to 99.67%. The rest of results varied depending on ODN type, dose, and exposure time. Conclusions: tested antisense ODNs stop colorectal cancer cell growth, and a combination of anti-telomerase and anti-k-ras is the most useful treatment. Efficacy is best with a higher dose and longer treatment period.Objetivo: evaluar la eficacia de oligonucleótidos anti k-ras y antitelomerasa para detener el crecimiento tumoral en el cáncer colorrectal. Material y métodos: se ha empleado una línea celular establecida de cáncer colorrectal humano (SW 480, ATTC®). Los oligodesoxirribonucleótidos (ODN) utilizados en el presente trabajo presentan modificación fosforotioato con el fin de mejorar su estabilidad en presencia de fluidos biológicos. Hemos utilizado un ODN antitelomerasa (Telp5), y dos ODN anti k-ras (AS-KRAS e ISIS). AS-KRAS actúa en el exón 1 e ISIS actúa a nivel de la unidad terminal de transcripción 5' del oncogen k-ras. Telp5 se une a la subunidad hTR de la telomerasa. Se han aplicado en concentraciones 1, 5, 10 y 20 micromolar, midiendo la viabilidad celular a las 48 y 72 horas de tratamiento. El análisis estadístico y el diseño de los gráficos se han realizado mediante el programa "Analyzing Data with GraphPad Prism-1999". GraphPad Sofware Inc., San Diego CA©. Para el tratamiento estadístico se ha utilizado el test t de Student. Resultados: la dosis mínima (1 µM) no fue efectiva ni a 48 ni a 72 horas postratamiento. Con la dosis máxima (20 µM durante 48 horas) y utilizando la combinación de AS-KRAS y Telp5 obtuvimos una reducción de la viabilidad celular del 99,67%. El resto de resultados fueron intermedios, dependiendo del tipo de oligonucleótido empleado, la dosis y el tiempo de exposición. Conclusiones: los oligonucleótidos antisentido probados detienen el crecimiento celular en el cáncer colorrectal, siendo la respuesta más eficaz la combinación de ambos y aumentando dicha eficacia con mayor dosis y tiempo de exposición.
