Evaluación de diferentes matrices cromatográficas para la determinación del tamaño molecular del polisacárido C de Neisseria meningitidis mediante HPLC.

Abstract

Las propiedades inmunológicas del polisacárido C de Neisseria meningitidis se correlacionan con su tamaño molecular, parámetro físico-químico que se determina mediante cromatografìa convencional en filtración en gel, según lo recomendado por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Sin embargo, la determinación del coeficiente de distribución (Kd) mediante este método, consume mucho tiempo y requiere relativamente grandes cantidades de muestra del producto. La Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es más eficiente y podría sustituir el método convencional. Para ello en el presente trabajo se evaluaron diferentes columnas cromatográficas y condiciones de corrida. En todos los casos se determinó el volumen muerto y el volumen total, así como el factor de capacidad, la eficiencia, la asimetría del pico y la repetibilidad. Se empleó como fase móvil NaCl 0,2 mol/L. La columna de Sepharose CL 4B (Pharmacia, Suecia) resultó ser la escogida para la determinación de Kd del polisacárido C mediante HPLC ya que fue la de mayor capacidad para retener la muestra; aunque resultó menos eficiente que la TSK G3000PW (Tosohaas, Japón), mostró igual asimetría del pico, mejor repetibilidad, y menor costo. Se estudiaron diferentes velocidades de flujo, concentraciones y volúmenes de muestra con el fin de determinar las mejores condiciones para el análisis, que resultaron ser las siguientes: Una inyección de 100 μl de muestra (0,1 mg) a 0,3 mL/min de flujo.

Keywords

• Polisacárido C
• HPLC
• Kd