用荧光定量PCR 方法检测转染细胞中外源基因的拷贝数

Abstract

【目的】探讨采用荧光定量PCR 技术检测脑源性神经营养因子(BDNF)基因转染细胞(PcDNA3.1(+)/BDNF/ CHO)中BDNF 的拷贝数。【方法】分别以同等质量的PcDNA3.1(+)/BDNF/CHO , PcDNA3.1(+)/CHO(空载体转染细胞) 及CHO 细胞的DNA 为模板, 在PE5700PCR 仪上进行荧光定量PCR 分析。每个样本共检测30 次, 结果采用q 检验分析。 【结果】PcDNA3.1(+)/ BDNF/CHO 细胞、PcDNA3.1(+)/ CHO 和CHO 细胞株中BDNF 的拷贝数分别为95 164 ±12 , 31 622 ±10, 31 622±11。q 检验结果显示前者与后两者之间有统计学意义, P 0 .05 。 PcDNA 3.1(+)/ BDNF/ CHO 细胞株中BDNF 的拷贝数是后二者的3 倍, 而后两者的拷贝数相同。【结论】BDNF 转染细胞株 中外源BDNF 基因是以2 个拷贝的比例整合到宿主细胞基因组中去的。